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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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aimeiaimei

银虫 (正式写手)

[交流] 电泳求助

大家好,俺最近做PCR 电泳 老是不顺利,不是没带,不清晰, 就是有带弯曲,不好记录!  换了新的缓冲,也没什么效果,很烦,帮帮忙吧?? 谢谢啦
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生活是在风雨中快乐跳舞
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
1、胶没凝好,不均匀
2、电压太高(跑得太快图很丑)或者太低(太慢发热容易降解)
3、胶是用buffer配的吧……用水配很容易出现这种问题
4、确定buffer真的是ok的?稀释倍数对否?一般是0.5*TBE,或者1*TAE
5、确保你的溶液用水都是纯净水(去离子),不要用矿泉水
6、不清晰或者没带是否是染色引起的?预染法,EB是1:20000加入胶,后染法确保染的时间够以及洗得够干净。
7、UV成像时间太长,会分解EB导致荧光淬灭

暂时想到这么多……
2楼2008-07-22 23:11:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

预染法,温度太高加入EB,同样会被分解掉
在60℃左右加即可,差不多就是用手背试温度,不至于烫得立刻离手的那种感觉
3楼2008-07-22 23:12:29
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aimeiaimei

银虫 (正式写手)

呵呵,非常感谢哦!我做的是聚丙烯酰胺凝胶电泳, 今天做的还不错!@ 很高兴啊
生活是在风雨中快乐跳舞
4楼2008-07-23 20:24:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

PCR产物跑PAGE?
一般只有短片段来跑PAGE才有意思~~~
5楼2008-07-23 22:16:43
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