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aimeiaimei

银虫 (正式写手)

[交流] 电泳求助

大家好，俺最近做PCR 电泳 老是不顺利，不是没带，不清晰， 就是有带弯曲，不好记录！  换了新的缓冲，也没什么效果，很烦，帮帮忙吧？？ 谢谢啦
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生活是在风雨中快乐跳舞
1楼 2008-07-22 23:00:08
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
1、胶没凝好，不均匀
2、电压太高（跑得太快图很丑）或者太低（太慢发热容易降解）
3、胶是用buffer配的吧……用水配很容易出现这种问题
4、确定buffer真的是ok的？稀释倍数对否？一般是0.5*TBE，或者1*TAE
5、确保你的溶液用水都是纯净水（去离子），不要用矿泉水
6、不清晰或者没带是否是染色引起的？预染法，EB是1：20000加入胶，后染法确保染的时间够以及洗得够干净。
7、UV成像时间太长，会分解EB导致荧光淬灭

暂时想到这么多……
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2楼2008-07-22 23:11:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
预染法，温度太高加入EB，同样会被分解掉
在60℃左右加即可，差不多就是用手背试温度，不至于烫得立刻离手的那种感觉
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3楼2008-07-22 23:12:29
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aimeiaimei

银虫 (正式写手)
呵呵，非常感谢哦！我做的是聚丙烯酰胺凝胶电泳， 今天做的还不错！@ 很高兴啊
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生活是在风雨中快乐跳舞
4楼2008-07-23 20:24:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
PCR产物跑PAGE？
一般只有短片段来跑PAGE才有意思~~~
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5楼2008-07-23 22:16:43
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