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纯化蛋白 已有4人参与
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不加His标签的蛋白如何纯化呀？ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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2楼2015-06-02 11:08:30
3楼2015-06-02 12:27:44
calorimetry
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5楼2015-06-02 13:17:02
6楼2015-06-02 13:39:19
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【答案】应助回帖
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柱内有气泡时，有人说可以用手指轻轻谈几下柱子，其实这一般解决不了什么问题。 最直接的方法是让缓冲溶液过几次柱子，同时兼做一下层析柱的介质的平衡。一般可以用20mmol/L的PB，200mmol/L的NaCl，pH=7.0，用5-10个柱体积过柱，冲洗时可观测层析柱的检测器的基线是否平稳，这样一般也就能把柱内的气泡赶走了。如果这样都不能赶走柱体内的介质的气泡，那么就只能重新装柱了，绝对不能带着气泡就上样过柱了。 一次装柱后可以反复使用，不必特殊处理，并不影响分离效果。洗脱完毕后，再用3到5个柱体积的缓冲溶液洗涤柱子即可。如果怀疑柱子中有残留的杂蛋白质和其他杂质，可以用0.2mol/L 或 NaOH1mol/L去除杂质，再用双蒸馏水平衡。对于粘附在柱上特别牢固的蛋白质可以用2%的蛋白酶溶液处理。 柱子的介质可以装在层析柱里，以供下次使用，问题不大。 |
7楼2015-06-05 10:15:12
