应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求各位前辈帮帮忙吧，快疯了。。。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 1708  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

崔兵杰

新虫 (初入文坛)

[交流] 求各位前辈帮帮忙吧，快疯了。。。 已有9人参与

　　我做的是真菌基因组ＤＮＡ提取，做了好久，电泳才好歹有了个结果（图１最右边一个），ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００，也不知道这是不是ＤＮＡ。然后又做ＰＣＲ，就是做不出东西，ＰＣＲ的原材料都是去年老师买的，学姐用过的，据说什么都没做出来。
　　ＰＣＲ总体系为５０微，包括　 10×扩增缓冲液 　　　　　５ul
•        　　　　　　  　　　　　　　dNTP混合物 　 　　　　　１ul
•        　　　　　　　　　　　　　 引物 （１００ｕＭ）　　　各２ul　
•        　　　　　　　　　　　　　 模板DNA 　　　 　　　　１．５ul　
•        　　　　　　　　　　 Taq DNA聚合酶 （５Ｕ／ul）　　０．４ul　
•        　　　　　　　　　　　　 ２５ｍＭ　Mg2+　　　　　　３ul
•        　　　　　　　　　　　　　 加双蒸水至 　　　　　　　５０ul
　　反应程序如下：９４℃　３ｍｉｎ，
　　　　　　　　　９４℃　１ｍｉｎ，
　　　　　　　　　起始退火温度４８℃　１ｍｉｎ，
　　　　　　　　　７２℃　３ｍｉｎ，
　　　　　　　　　３０个循环后７２℃　１０ｍｉｎ，
　　模板用的图１最右边的样品，引物是ＮＳ１和ＮＳ８，因为计算这两个引物ＴＭ值相差比较大，一个４９℃，一个５９℃，相差有１０度，所以每循环退火温度升高０．４℃（这是叫ｔｏｕｃｈ－ｄｏｗｎ　ＰＣＲ吗？），结果就做出了图２的样子，全是引物二聚体了？ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００。
　　我只有六个金币，跪求各位前辈帮帮忙啊，小弟感激不尽！！！
求各位前辈帮帮忙吧，快疯了。。。
图１.JPG


求各位前辈帮帮忙吧，快疯了。。。-1
图２.jpg
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xueyuxx

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-05-25 22:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没想好名字

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
老实说，第一块胶你能把Market跑成这样也算是了不起了，同时你的Market选择不对，基因组你至少要用1W及以上的Market.dNTP加的太少，应该加5ul左右。变性和退火时间应改为30S，延伸时间过长，一般延伸的速度在1KBP到2KBP。同时降落PCR是用来优化条件的，不代表你能直接通过降落PCR做出结果，你错误太多了，建议好好看下基因工程这本书
赞一下 回复此楼
12楼2015-05-29 12:46:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

xueyuxx

木虫 (小有名气)
送红花一朵
围观。。。。
回复此楼
2楼2015-05-25 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jkamm

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本人认为不是引物问题就是模板质量问题了
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-26 00:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔兵杰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jkamm at 2015-05-26 00:26:41
本人认为不是引物问题就是模板质量问题了

那是需要买新的引物或者重新提ＤＮＡ　？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-05-26 08:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +7 大馋小子 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:31 by 无际的草原
[考研] 295求调剂 +4 1428151015 2026-03-27 5/250 2026-03-27 19:53 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 085600材料与化工306 +10 z1z2z3879 2026-03-21 11/550 2026-03-27 11:31 by wangjy2002
[考研] 334求调剂 +3 雨清天晴 2026-03-21 3/150 2026-03-27 11:30 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 材料学硕，求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭