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求各位前辈帮帮忙吧，快疯了。。。 已有9人参与
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我做的是真菌基因组ＤＮＡ提取，做了好久，电泳才好歹有了个结果（图１最右边一个），ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００，也不知道这是不是ＤＮＡ。然后又做ＰＣＲ，就是做不出东西，ＰＣＲ的原材料都是去年老师买的，学姐用过的，据说什么都没做出来。 ＰＣＲ总体系为５０微，包括 10×扩增缓冲液 ５ul • dNTP混合物 １ul • 引物 （１００ｕＭ） 各２ul • 模板DNA １．５ul • Taq DNA聚合酶 （５Ｕ／ul） ０．４ul • ２５ｍＭ Mg2+ ３ul • 加双蒸水至 ５０ul 反应程序如下：９４℃ ３ｍｉｎ， ９４℃ １ｍｉｎ， 起始退火温度４８℃ １ｍｉｎ， ７２℃ ３ｍｉｎ， ３０个循环后７２℃ １０ｍｉｎ， 模板用的图１最右边的样品，引物是ＮＳ１和ＮＳ８，因为计算这两个引物ＴＭ值相差比较大，一个４９℃，一个５９℃，相差有１０度，所以每循环退火温度升高０．４℃（这是叫ｔｏｕｃｈ－ｄｏｗｎ ＰＣＲ吗？），结果就做出了图２的样子，全是引物二聚体了？ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００。 我只有六个金币，跪求各位前辈帮帮忙啊，小弟感激不尽！！！  图１.JPG  图２.jpg |
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12楼2015-05-29 12:46:47
xueyuxx
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