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louise0220

新虫 (正式写手)

[求助] 关于细胞ROS测定遇到问题,急求解答,重谢!!!

我最近想用化学荧光法(DCFH-DA染料)测定胞内的ROS含量,购买的是南京建成的试剂盒。说明书上的操作步骤是加入DCFH-DA(10μM)至培养基中,然后加入细胞,37℃孵育细胞30min-几个小时,然后清洗残余的探针,最后用PBS进行重悬后加入到96孔板中,用荧光酶标仪测定。现在有以下几个细节还不清楚:1、这样的操作,最后的数据是怎样表达,是荧光强度吗?由于我不同处理组中没法保证细胞浓度一致,用绝对荧光强度显然不合适。
                  2、我的样品不是常规的分散均匀的小细胞,而是达到mm级的生物颗粒,如果这样的话肯定没法加入到酶标板内进行读数测定。我可不可以用匀浆器捣碎后再用超声破碎,离心后取上清液立即测定ROS,这样的话最终结果就用荧光强度/g蛋白来表示。现在不知道这种做法是否合适。
还请有经验的虫子多多指教啊。。。
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