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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关松荫《土壤酶及其研究法》中磷酸酶活测定中的一点困惑
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秦俊超527

新虫 (小有名气)

[求助] 关松荫《土壤酶及其研究法》中磷酸酶活测定中的一点困惑 已有2人参与

在根据关松荫的方法测磷酸酶活的时候，采用磷酸苯二钠比色法1，实验原理是根据苯酚与氯代二溴对苯醌亚胺试剂反应显色，但是我按照观松荫方法实验并没显色，做标准曲线时是一条水平线。求解释，求解决方法。
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1楼 2015-05-24 11:29:56
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我没有具体测过这种酶。但是酶活性没有，一般是就几种情况，酶过期失活了，活性因子缺失，存在抑制剂，底物不合格，能够不能说一下具体情况。
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3楼2015-06-01 13:10:17
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秦俊超527

新虫 (小有名气)
都不懂吗！！！
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2楼2015-05-31 10:11:20
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秦俊超527

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-01 13:10:17
我没有具体测过这种酶。但是酶活性没有，一般是就几种情况，酶过期失活了，活性因子缺失，存在抑制剂，底物不合格，能够不能说一下具体情况。

不是没有酶活性。
       根据关松荫的方法，我测土壤磷酸酶的活性。采用磷酸苯二钠比色法1.原理是磷酸苯二钠在磷酸酶的酶促反应下产生酚，酚与显色剂2，6-二溴苯醌氯酰亚胺反映显色。做标准曲线时不同浓度的酚与显色剂反应，显色，比色，得到与浓度相应的吸光度值。现在的问题是在做标准曲线时，该有的显色没有，比色时，不同浓度的酚溶液，吸光度值一样。所以样品测量就进行不下去。
      之后我又用了关松荫的磷酸苯二钠比色法二，主要区别就是显色剂改了，在做标准曲线时，显色明显，但是比色时吸光度变化很快，因而测出的值没有意义。在较长一段时间内（一天），颜色变化从红变黄再变绿。
      这是我毕业论文的一部分，都快愁死了，很需要帮助，请前辈赐教。
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4楼2015-06-01 18:01:28
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
能不能告诉你用的那本酶活力测定实验手册，说出书名即可，我自己会去查。

我现在没有去图书馆，手里有：（德）B.施特尔马赫 著，钱嘉渊 译，酶的测定方法，中国轻工出版社，1992，其中没有磷酸酶的测定。
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5楼2015-06-02 12:06:31
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秦俊超527

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-02 12:06:31
能不能告诉你用的那本酶活力测定实验手册，说出书名即可，我自己会去查。

我现在没有去图书馆，手里有：（德）B.施特尔马赫 著，钱嘉渊 译，酶的测定方法，中国轻工出版社，1992，其中没有磷酸酶的测定。

关松荫《土壤酶及其研究法》   网上图书馆就有。我是在超星数字图使馆看的。
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6楼2015-06-02 12:11:38
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 秦俊超527 at 2015-06-02 12:11:38
关松荫《土壤酶及其研究法》   网上图书馆就有。我是在超星数字图使馆看的。...

我看一下文献，再和你讨论。
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7楼2015-06-02 12:20:38
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秦俊超527

新虫 (小有名气)
关松荫的磷酸苯二钠比色法二，主要区别就是显色剂改了，在做标准曲线时，显色明显，但是比色时吸光度变化很快，因而测出的值没有意义。在较长一段时间内（一天），颜色变化从红变黄再变绿。
  针对这个问题，我在做标准曲线时让其显色稳定25分钟后进行比色，数据比较稳定，算是解决问题了。
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8楼2015-06-07 10:34:19
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 秦俊超527 at 2015-06-07 10:34:19
关松荫的磷酸苯二钠比色法二，主要区别就是显色剂改了，在做标准曲线时，显色明显，但是比色时吸光度变化很快，因而测出的值没有意义。在较长一段时间内（一天），颜色变化从红变黄再变绿。
  针对这个问题，我在做 ...

祝贺你！
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9楼2015-06-09 08:52:18
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秦俊超527

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-09 08:52:18
祝贺你！...

谢谢
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10楼2015-06-18 09:44:42
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