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diedieyi

新虫 (小有名气)

[交流] 基因工程同时导入两个目的基因有前辈做过吗?小硕求助! 已有1人参与

导师让我做导入双基因的基因工程,实验室有师姐做过单基因导入,不过她还有一个月就毕业了,我在她身上估计没有机会学到什么东西了。实验室其他人没有什么基础。我好焦虑,担心太难做了,以至于硕士三年发不出文章。我很想发文章。做单基因导入的师姐劝我不要做这个,说偶然性太大,不好做,怕三年就一事无成了。师兄没有做基因工程,他做的是蛋白组学,他说师姐之所以这么说是因为她目的是去考公务员,志向不在这里,因此觉得难做,他鼓励我坚持调研基因工程,说做出来就牛掰掰。我对硕士生涯要求不高,只求多发文章。求做过基因工程的前辈们指点指点我,究竟要不要试试。

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mazhenggen

铁虫 (正式写手)

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diedieyi: 金币+4 2015-05-26 21:52:42
你用的是什么宿主细胞呢,导入多个基因的技术很久以前就很成熟了,有单启动子多基因,多启动子多基因。当然啦,基因越多难度可能越大,但是两个基因是没有问题的,不用担心,好好做吧。弱弱的问一下,你们实验室分子生物方面是不是做的比较少呢?

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我喜欢所以我做
2楼2015-05-24 09:25:56
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diedieyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mazhenggen at 2015-05-24 09:25:56
你用的是什么宿主细胞呢,导入多个基因的技术很久以前就很成熟了,有单启动子多基因,多启动子多基因。当然啦,基因越多难度可能越大,但是两个基因是没有问题的,不用担心,好好做吧。弱弱的问一下,你们实验室分子 ...

大肠杆菌,做污水处理方面。我们实验室目前没有做基因工程的了,请问前辈您做过基因工程吗,做的是哪方面的?

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3楼2015-05-24 09:38:55
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mazhenggen

铁虫 (正式写手)


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3楼: Originally posted by diedieyi at 2015-05-24 09:38:55
大肠杆菌,做污水处理方面。我们实验室目前没有做基因工程的了,请问前辈您做过基因工程吗,做的是哪方面的?

...

主要做重组蛋白、酶、抗体研究,原核表达和真核表达都做过。大肠杆菌导入两个基因比较好操作,只要选择适合的载体就好了,只不过要确保你的蛋白能够在大肠杆菌中正确的折叠,一般小点的蛋白和结构不复杂的可以很好的在大肠杆菌中可溶表达。导入基因的目的是让其表达,大肠杆菌的表达一般都是通过质粒来实现,也有导入基因组的,但不常用。建议你先看看分子生物学方面的书籍和相关资料,掌握基因工程菌株构建方法。

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我喜欢所以我做
4楼2015-05-24 11:15:42
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diedieyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mazhenggen at 2015-05-24 11:15:42
主要做重组蛋白、酶、抗体研究,原核表达和真核表达都做过。大肠杆菌导入两个基因比较好操作,只要选择适合的载体就好了,只不过要确保你的蛋白能够在大肠杆菌中正确的折叠,一般小点的蛋白和结构不复杂的可以很好 ...

谢谢您,这么一说我稍微找到一些勇气了。

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5楼2015-05-24 12:26:49
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

★ ★
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diedieyi: 金币+1 2015-05-26 21:52:56
导入多个基因很简单啊,可以构建在一个载体上,也可以在两个载体上共表达,没什么的

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6楼2015-05-24 17:06:39
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diedieyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-05-24 17:06:39
导入多个基因很简单啊,可以构建在一个载体上,也可以在两个载体上共表达,没什么的

请问怎么入门?

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7楼2015-05-25 07:01:46
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reallpf

木虫 (正式写手)


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怎么入门?就是一直转,转了再转!大肠转入3-4个基因都是没问题的;做代谢途径改造的,转的更多,一环扣一环,野生菌能转好几个基因还得再敲除几个基因。
8楼2015-05-27 10:48:28
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by diedieyi at 2015-05-25 07:01:46
请问怎么入门?
...

入门就是埋头苦干,切啊连啊,没窍门。手熟就好

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9楼2015-05-27 20:13:39
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