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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 聚丙烯酰胺凝胶电泳中的亲和硅烷如何配置以及如何将两块玻璃板分离
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金虫 (小有名气)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳中的亲和硅烷如何配置以及如何将两块玻璃板分离 已有1人参与

第一次做聚丙烯酰胺凝胶电泳，求大神帮忙，（1）亲和硅烷应该是直接涂抹于玻璃板上，还是加入冰醋酸和95%的乙醇配制成混合溶液，如果是配制成混合溶液，加入试剂的比例应该是多少？（2）还有电泳结束后用什么方法可以把两块玻璃板分开，但是不影响在玻璃板上聚丙烯酰胺凝胶（我一般是用钥匙将玻璃板撬开，聚丙烯酰胺凝胶就会同时被撬开，在漂洗、染色的过程中胶和玻璃板就会分离），感谢大家的帮助！
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1楼 2015-05-23 16:59:38
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吴亚滨

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般采用o.5%的亲和硅烷：1ml 95%乙醇+5ul冰醋酸+5ul亲和硅烷。也可适当增加冰醋酸和亲和硅烷的浓度。另一玻璃板上个要擦拭2%玻璃硅烷：490ml乙醇+10ml剥离硅烷。剥离硅烷的浓度也可大点，比如10%等。撬开玻璃板时注意从底部撬开。电泳完后，固定、银染的时间要把握好，各不要超过20min，时间长了容易脱胶。若不想脱胶就加大亲和硅烷的浓度，但适可而止。显影的时候要以清晰条带出现为准。
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2楼2015-06-28 08:57:47
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