24小时热门版块排行榜    

查看: 665  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

andygu

[交流] 关于PCR的问题

我手头上有两个东西,A和B.
小P的时候A和B都P出来了.
随后大P.
第一次两个都没P出来,第二次A被P出来了,B没有,第三次B被P出来了,A没有。
郁闷。
我小P用的是20UL体系,大P用的是100的.
20UL体系如下:
模板0.2UL
4*的dNTP 0.4UL
UP 2UL
DOWN 2UL
TAQ 0.2UL
BUFFER 2UL
DDH2O 12UL
Mg2+(25mM) 1.2UL
条件:
94度 5分钟
94度 50秒
61度 50秒
72度 90秒
72度 5分钟

哪里会出问题呢?
谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

allen8368

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
引用回帖:
Originally posted by weiwei1 at 2008-7-18 09:10:
20UL体系,UP和DOWN是不是太多了,个人认为一般用1就够了。你的片段多长呢?需要61度 50秒。最后的72度 5分钟,延长至10分钟试试。

引物的用量是有点多 变性和退火时间都有点长  建议模板量可以适当提高一点
比方说1  
还有就是一定要做阴性对照 像你这种有时候P的出来有时候又没有的情况 必须设立严格的阴性对照
慢慢的认识你,再慢慢的忘记你...........
5楼2008-07-18 15:21:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

weiwei1

木虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
20UL体系,UP和DOWN是不是太多了,个人认为一般用1就够了。你的片段多长呢?需要61度 50秒。最后的72度 5分钟,延长至10分钟试试。
2楼2008-07-18 09:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenspringmi

银虫 (正式写手)

那就用小体系多做两管,一起回收
3楼2008-07-18 09:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andygu

引用回帖:
Originally posted by weiwei1 at 2008-7-18 09:10:
20UL体系,UP和DOWN是不是太多了,个人认为一般用1就够了。你的片段多长呢?需要61度 50秒。最后的72度 5分钟,延长至10分钟试试。

可是小P P出来了.
只是大P没有P出来.
4楼2008-07-18 09:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见