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向阳坊

铜虫 (正式写手)

[交流] 蛋白提取时，TCA和丙酮的作用是什么？

用三氯乙酸和丙酮提取蛋白时，TCA和丙酮的作用分别是什么？
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1楼 2008-07-16 09:18:21
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raindrop8316

金虫 (正式写手)
共同沉淀蛋白
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书到用时方恨少 钱到月底不够花
2楼2008-07-16 10:12:07
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
二者均起到了沉淀蛋白的作用
蛋白被二者沉淀后，用丙酮再将沉淀悬浮清洗，可以去除TCA；丙酮挥发后，二者均可从蛋白中去除
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3楼2008-07-16 10:26:12
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向阳坊

铜虫 (正式写手)
谢谢！
还想问问，TCA与丙酮都会使蛋白变性，这样提取出来的蛋白是否已经变性呢？

[ Last edited by 向阳坊 on 2008-7-16 at 15:23 ]
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4楼2008-07-16 15:21:11
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biogefart

木虫 (著名写手)

当然是变性了。

TCA好像还是不可逆变性
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闹太套
5楼2008-07-16 17:03:02
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richujs

木虫 (正式写手)
低温的丙酮短时间不会变形，但丙酮要预冷的
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思想是能力和力量的源泉
6楼2008-07-16 21:52:21
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mever

木虫 (正式写手)
丙酮在提取蛋白质中的主要作用是通过有机溶剂破坏蛋白质的水化层，降低介电常数 增强带电蛋白质分子的相互作用，促进蛋白颗粒的聚集沉淀。
丙酮要求低温操作且尽量缩短时间 避免蛋白变性。

TCA的作用主要是：
TCA在酸性条件下可与蛋白质形成不溶性盐.
同时作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变, 暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀。
但是TCA可能渗入蛋白质分子内部而使之较难被完全除去, 在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片, 所以在提取大分子蛋白质时要使用丙酮尽量将TCA抽提干净。
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7楼2008-07-17 07:32:30
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向阳坊

铜虫 (正式写手)
回答得挺详细的，谢谢各位的帮忙！
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8楼2008-07-17 22:50:00
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