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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 外植体共培养过程中死亡原因！
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phytoman

银虫 (小有名气)

[交流] 外植体共培养过程中死亡原因！

我是做农杆菌介导的遗传转化的，但是在除菌过程中外植体死亡。
我用的是ATCC15834，侵染了1h，使用1/2M+头孢霉素500mg/L除菌。恳请朋友们多多帮忙。
我是金币不多，先谢谢大家！

[ Last edited by phytoman on 2008-7-15 at 14:39 ]
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1楼 2008-07-15 10:29:51
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
phytoman(金币+1,VIP+0):谢谢兄弟指点
你是转化的什么材料啊，是不是材料本身就很容易死亡呢，或是材料对农杆菌过于敏感，共培养才1小时就死亡确实不可思议。共培养时间要大于16小时才有可能被转化哦，你说的1小时不会是侵染1小时吧？
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
2楼2008-07-15 13:00:43
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phytoman

银虫 (小有名气)
谢谢兄弟指点，的确我说的是侵染1h。我的材料是百里香
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3楼2008-07-15 14:39:13
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swallowhehe

★
phytoman(金币+1,VIP+0):谢谢兄弟!
我认为你要先试试你用的植物材料对该抗生素的敏感性啊。我做的是唇形科植物，选择培养用的是200mg/L的头孢
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4楼2008-07-17 14:50:50
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静水深流106

铁虫 (初入文坛)
★ ★
phytoman(金币+2,VIP+0):兄弟说的有道理,待我按你的方法试试,有结果了再告诉大家.
如果是侵染后的植物材料褐化了可能是侵染时间太长了，一般植物材料侵染10分钟左右，百里香的叶片厚点可以侵染15分钟；或者是菌液浓度太大，一般菌液的OD值为0.5-0.8。侵染后可以将外植体用无菌的滤纸将表面过量的菌液吸干，共培养时间不要太长，一般48小时左右，脱菌时可用无菌水漂洗外植体4-5次后用无菌滤纸吸干，再转入筛选培养基；抗生素的浓度不要太高，孢霉素250mg/L左右，太高对植物材料也有影响
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5楼2008-07-18 02:35:49
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zuolili213

至尊木虫 (正式写手)
★
phytoman(金币+1,VIP+0):谢谢兄弟!
同意楼上说的，应该是侵染时间太长了，我们侵染叶片一般在10min左右，根据不同的外植体材料侵染时间不同，但侵染1h时间可能是太长了
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坚持就是胜利！
6楼2008-07-18 11:12:35
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