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清雅风

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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我想默默地问一下楼主,你看胶的时候把做胶的板取掉没有?
朝着自己的理想奔跑,就是幸福!
11楼2015-05-09 17:28:47
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Lotus_ping

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-10 22:55:59
DNA模板是否降解?可以换个模板检测一下PCR条件是否有问题,如果没有问题只能一个个换试剂来寻找PCR问题了
12楼2015-05-09 21:42:42
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-10 22:56:21
首先,Marker能看到。说明不是电泳的问题。预计pcr产物片段多大。从最下面样品有淡淡的亮,他可能是引物或者二聚体。引物出现降解失效的概率很小。所以问题出现在pcr扩增。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2015-05-09 22:40:10
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有就是引物浓度是多少。50ul加4ul过多了。模板加了4ul。。。。这个也太多了但是电泳看不见模板的条带。不知道模板检测过没有。。如果模板确定有。引物没问题。酶没有坏。可能就是tm值的问题

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2015-05-09 22:43:11
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安道尔

铜虫 (正式写手)

那我算幸运的,学了1次,重复3次,效果都不错,就是EB有毒,不小心就会溅。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2015-05-09 23:01:33
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wyqzl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 以后2012 at 2015-05-09 15:37:02
可能是引物失效了,你一一排除原因吧

可能引物搞错了吧。胶应该没问题,电压似乎有点不稳定。或者退火温度有问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
16楼2015-05-11 18:25:23
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

太粗糙,做好陰性,陽性對照,這樣比較好找原因。你可以考慮以下幾個因素:模板有沒有問題,引物,pcr程序是不是合適,主要退火溫度

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
17楼2015-05-11 22:51:32
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

marker都有问题,都没有跑开,重新跑吧,
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
18楼2015-05-12 10:35:35
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zybqx

银虫 (小有名气)

你说你师姐之前做得出来,你做不出来,你师姐提的DNA比你好,所以对buffer浓度要求不高,你做不出来可能是你DNA不纯,你把buffer浓度提高试试。我觉得你们的buffer浓度太低了,我们用的buffer都是510 buffer 配500的水
19楼2015-05-22 08:50:20
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