【答案】应助回帖

朝着自己的理想奔跑，就是幸福！

11楼2015-05-09 17:28:47

Lotus_ping

新虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 351.4
散金: 1018
红花: 6
帖子: 266
在线: 103.4小时
虫号: 2646555
注册: 2013-09-11
专业: 植物学研究的新技术、新方

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-10 22:55:59

DNA模板是否降解？可以换个模板检测一下PCR条件是否有问题，如果没有问题只能一个个换试剂来寻找PCR问题了

12楼2015-05-09 21:42:42

酒家何处

新虫 (小有名气)

应助: 29 (小学生)
金币: 187.8
红花: 1
帖子: 70
在线: 19.6小时
虫号: 3823340
注册: 2015-04-20

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-10 22:56:21

首先，Marker能看到。说明不是电泳的问题。预计pcr产物片段多大。从最下面样品有淡淡的亮，他可能是引物或者二聚体。引物出现降解失效的概率很小。所以问题出现在pcr扩增。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]

13楼2015-05-09 22:40:10

酒家何处

新虫 (小有名气)

应助: 29 (小学生)
金币: 187.8
红花: 1
帖子: 70
在线: 19.6小时
虫号: 3823340
注册: 2015-04-20

【答案】应助回帖

还有就是引物浓度是多少。50ul加4ul过多了。模板加了4ul。。。。这个也太多了但是电泳看不见模板的条带。不知道模板检测过没有。。如果模板确定有。引物没问题。酶没有坏。可能就是tm值的问题

[ 发自小木虫客户端 ]

14楼2015-05-09 22:43:11

安道尔

铜虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 3264.9
红花: 2
帖子: 375
在线: 115.5小时
虫号: 3825392
注册: 2015-04-21
专业: 药物学

那我算幸运的，学了1次，重复3次，效果都不错，就是EB有毒，不小心就会溅。。。。

[ 发自小木虫客户端 ]

15楼2015-05-09 23:01:33

wyqzl

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 271.4
散金: 25
帖子: 21
在线: 5.8小时
虫号: 3345350
注册: 2014-07-30

引用回帖:

10楼: Originally posted by 以后2012 at 2015-05-09 15:37:02
可能是引物失效了，你一一排除原因吧

可能引物搞错了吧。胶应该没问题，电压似乎有点不稳定。或者退火温度有问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

16楼2015-05-11 18:25:23

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

应助: 92 (初中生)
金币: 2284.9
散金: 606
红花: 53
帖子: 2249
在线: 818.5小时
虫号: 1146270
注册: 2010-11-14
专业: 生物物理、生物化学与分子

太粗糙，做好陰性，陽性對照，這樣比較好找原因。你可以考慮以下幾個因素:模板有沒有問題，引物，pcr程序是不是合適，主要退火溫度

[ 发自小木虫客户端 ]

天道酬勤

17楼2015-05-11 22:51:32

wuwenmei

新虫 (小有名气)

应助: 10 (幼儿园)
金币: 1472.1
散金: 8
红花: 1
帖子: 280
在线: 54.9小时
虫号: 3114800
注册: 2014-04-05
性别: GG
专业: 蛋白质组学

marker都有问题，都没有跑开，重新跑吧，

下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！

18楼2015-05-12 10:35:35

zybqx

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 238.2
散金: 129
红花: 1
帖子: 155
在线: 86.1小时
虫号: 3221033
注册: 2014-05-20
专业: 环境化工

你说你师姐之前做得出来，你做不出来，你师姐提的DNA比你好，所以对buffer浓度要求不高，你做不出来可能是你DNA不纯，你把buffer浓度提高试试。我觉得你们的buffer浓度太低了，我们用的buffer都是510 buffer 配500的水

19楼2015-05-22 08:50:20