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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于退火温度
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xiaricha

银虫 (小有名气)

[交流] 关于退火温度

引物的退火温度问题
大家好：我设计了几对引物，在TAKARA合成的，怎样能够知道引物的准备的退火温度啊？好几对引物如果都做梯度的话既浪费时间也浪费试剂啊！谢谢回答！

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:38 ]
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1楼 2008-07-12 09:38:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
当初设计引物的时候，软件不应该给出了Tm值了？
一般把Tm比较低的引物，再减3~5度就可以P出来了
当然做降落PCR的话就可以不用摸温度直接做。
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3楼2008-07-12 09:51:21
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chuyinghao

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
你根据它给你的最小的引物GC%之后.Tm减5度，然后你看到特异性条带的话，加退火温度，没有的话，减退火温度。差不多之后你再做温度梯度来精确测定！
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2楼2008-07-12 09:49:07
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
一般情况下，我都是根据设计引物时的退火温度的，设计好的退火温度，然后减去5度看是PCR
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春暖花开
4楼2008-07-12 20:23:35
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iamrohy

银虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
去查查亲本的经验温度吧
其实用软件里的GC含量算出来的退火温度不是特别好
我们实验室一般p的时候只有几个特定的温度
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多俗呀，不写了
5楼2008-07-13 10:49:48
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