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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaricha

银虫 (小有名气)

[交流] 关于退火温度

引物的退火温度问题
大家好:我设计了几对引物,在TAKARA合成的,怎样能够知道引物的准备的退火温度啊?好几对引物如果都做梯度的话既浪费时间也浪费试剂啊!谢谢回答!

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:38 ]
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chuyinghao

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
你根据它给你的最小的引物GC%之后.Tm减5度,然后你看到特异性条带的话,加退火温度,没有的话,减退火温度。差不多之后你再做温度梯度来精确测定!
2楼2008-07-12 09:49:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
当初设计引物的时候,软件不应该给出了Tm值了?
一般把Tm比较低的引物,再减3~5度就可以P出来了
当然做降落PCR的话就可以不用摸温度直接做。
3楼2008-07-12 09:51:21
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
一般情况下,我都是根据设计引物时的退火温度的,设计好的退火温度,然后减去5度看是PCR
春暖花开
4楼2008-07-12 20:23:35
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iamrohy

银虫 (初入文坛)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
去查查亲本的经验温度吧
其实用软件里的GC含量算出来的退火温度不是特别好
我们实验室一般p的时候只有几个特定的温度
多俗呀,不写了
5楼2008-07-13 10:49:48
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shawcat

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
好像一般是4XGC个数+2XAT个数 ---5
6楼2008-07-22 23:20:59
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Frank2007198

铜虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
宝生物的引物单上都有退火温度的
7楼2008-07-23 21:20:16
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wolong1984

银虫 (小有名气)

就是,公司给合成的引物一般都有建议退火温度吧??!!
8楼2008-07-27 13:35:12
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