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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 病原/病毒 » 有没有研究互作蛋白的同道中人，江湖救急 555...
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875737697

新虫 (小有名气)

[求助] 有没有研究互作蛋白的同道中人，江湖救急 555... 已有2人参与

我是一名研一的童鞋，导师给我说让我研究**菌与宿主的互作关系，主要就是互作蛋白，他还说前期工作就是基因敲除。我在网上看了一些关于互作蛋白研究的方法，无非就是酵母双杂交和免疫共沉淀。但是当我殚精竭虑地终于读懂了一篇关于这方面的博士论文，知道了什么是酵母双杂交和免疫共沉淀后，我们实验室博士师姐说我的想法不可行，我们实验室没有target载体、bait载体、酵母细胞，并且这些买起来好贵好贵，更重要的是研究互作蛋白前必须构建**菌的cDNA文库，我研究互作蛋白还不如直接构建文库，但是真的需要构建吗？构建一个细菌的cDNA文库需要多久，花费是多少我都一无所知。我该怎么办？   本人只求毕业呀
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1楼 2015-05-06 11:29:36
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有BIFC，FRET，关键看你们组里有没有相应基础了。酵母建平台很麻烦，但有成熟体系出结果很快
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875737697
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2楼2015-05-06 11:33:37
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875737697

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-06 11:33:37
还有BIFC，FRET，关键看你们组里有没有相应基础了。酵母建平台很麻烦，但有成熟体系出结果很快

谢谢你的回答，是不是做酵母双杂交必须构建细菌的cDNA文库？构建cDNA文库需要多长时间？我们实验室比较成熟的平台就是克隆表达，还有一些Elisa等免疫学相关技术，我想问下我这种情况研究互作蛋白怎样比较好出结果？
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3楼2015-05-06 14:50:25
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

作文库是为了筛选潜在作用蛋白，已知蛋白验证没那么麻烦，直接导入表达载体上酵母即可

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-05-06 14:55:24
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875737697

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-06 14:55:24
作文库是为了筛选潜在作用蛋白，已知蛋白验证没那么麻烦，直接导入表达载体上酵母即可

我们导师说互作关系研究的前期是基因敲除，但是我看了相关文献，有点迷糊，是不是基因敲除目的就是为了确定目的蛋白？然后再进一步对它的互作蛋白进行筛选？
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5楼2015-05-06 14:59:56
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

酵母双杂交之类只是一个验证两蛋白间是否有相互作用的手段，是将你要研究的蛋白导入酵母中实验。至于你导师说的敲除，是你自己课题的前置研究

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2015-05-06 15:03:31
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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炮灰！

然后老板找公司做文库吧
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致良知
7楼2015-05-09 00:18:12
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875737697

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by quiller2000 at 2015-05-09 00:18:12
炮灰！

然后老板找公司做文库吧

师姐说文库都是由自己来做的？你的意思是不是我研究互作蛋白很难出结果了？
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8楼2015-05-11 09:15:48
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