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875737697

新虫 (小有名气)

[求助] 有没有研究互作蛋白的同道中人,江湖救急 555... 已有2人参与

我是一名研一的童鞋,导师给我说让我研究**菌与宿主的互作关系,主要就是互作蛋白,他还说前期工作就是基因敲除。我在网上看了一些关于互作蛋白研究的方法,无非就是酵母双杂交和免疫共沉淀。但是当我殚精竭虑地终于读懂了一篇关于这方面的博士论文,知道了什么是酵母双杂交和免疫共沉淀后,我们实验室博士师姐说我的想法不可行,我们实验室没有target载体、bait载体、酵母细胞,并且这些买起来好贵好贵,更重要的是研究互作蛋白前必须构建**菌的cDNA文库,我研究互作蛋白还不如直接构建文库,但是真的需要构建吗?构建一个细菌的cDNA文库需要多久,花费是多少我都一无所知。我该怎么办?   本人只求毕业呀
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

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还有BIFC,FRET,关键看你们组里有没有相应基础了。酵母建平台很麻烦,但有成熟体系出结果很快

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植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2015-05-06 11:33:37
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875737697

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-06 11:33:37
还有BIFC,FRET,关键看你们组里有没有相应基础了。酵母建平台很麻烦,但有成熟体系出结果很快

谢谢你的回答,是不是做酵母双杂交必须构建细菌的cDNA文库?构建cDNA文库需要多长时间?我们实验室比较成熟的平台就是克隆表达,还有一些Elisa等免疫学相关技术,我想问下我这种情况研究互作蛋白怎样比较好出结果?
3楼2015-05-06 14:50:25
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

作文库是为了筛选潜在作用蛋白,已知蛋白验证没那么麻烦,直接导入表达载体上酵母即可

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-05-06 14:55:24
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875737697

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-06 14:55:24
作文库是为了筛选潜在作用蛋白,已知蛋白验证没那么麻烦,直接导入表达载体上酵母即可

我们导师说互作关系研究的前期是基因敲除,但是我看了相关文献,有点迷糊,是不是基因敲除目的就是为了确定目的蛋白?然后再进一步对它的互作蛋白进行筛选?
5楼2015-05-06 14:59:56
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

酵母双杂交之类只是一个验证两蛋白间是否有相互作用的手段,是将你要研究的蛋白导入酵母中实验。至于你导师说的敲除,是你自己课题的前置研究

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6楼2015-05-06 15:03:31
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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炮灰!

然后老板找公司做文库吧
致良知
7楼2015-05-09 00:18:12
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875737697

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by quiller2000 at 2015-05-09 00:18:12
炮灰!

然后老板找公司做文库吧

师姐说文库都是由自己来做的?你的意思是不是我研究互作蛋白很难出结果了?
8楼2015-05-11 09:15:48
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