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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 重组子转化,菌液诱导破胞出现黑色 已有1人参与

构建重组子,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,得到的转化子验证正确,挑取转化子诱导培养。
     取诱导液离心,倒掉上清,菌体用pH=4.8的柠檬酸缓冲液进行重悬,然后进行超声破碎,再离心,
     发现菌体都成黑色的了,本来是准备用破胞后的菌体进行PAGE检测的,这样还能用吗?出现这个情况正常吗?
     麻烦做过这个的亲们留下脚印,谢!
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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lhy_2008

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

破胞后的沉淀做SDS-PAGE分析,你表达的蛋白形成包涵体了。可以先用2M的尿素洗涤沉淀,然后用8M溶解,取部分溶液与loading buffer混匀、煮沸、离心、上样即可。破胞之后,离心下来的沉淀都会有黑色的,完全正常。
2楼2015-05-19 00:53:31
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