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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 重组子转化，菌液诱导破胞出现黑色
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 重组子转化，菌液诱导破胞出现黑色 已有1人参与

构建重组子，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，得到的转化子验证正确，挑取转化子诱导培养。
     取诱导液离心，倒掉上清，菌体用pH=4.8的柠檬酸缓冲液进行重悬，然后进行超声破碎，再离心，
     发现菌体都成黑色的了，本来是准备用破胞后的菌体进行PAGE检测的，这样还能用吗？出现这个情况正常吗？
     麻烦做过这个的亲们留下脚印，谢！
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2015-05-05 10:21:17
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lhy_2008

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

破胞后的沉淀做SDS-PAGE分析，你表达的蛋白形成包涵体了。可以先用2M的尿素洗涤沉淀，然后用8M溶解，取部分溶液与loading buffer混匀、煮沸、离心、上样即可。破胞之后，离心下来的沉淀都会有黑色的，完全正常。
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2楼2015-05-19 00:53:31
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