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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 为什么我的RT-PCR老是扩不到目的条带

请教大家,我做植物基因的反转录PCR,总RNA提出来后做cDNA第一链反应,再接着做PCR,用特异引物扩增一直是弥散,改用Poly T后又扩不到我要的目的条带,甚是着急,请高手指点了,谢谢:)
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
1、引物浓度降低点
2、设计的引物要排除基因组DNA的干扰,因此是跨内含子设计。
3、是不是胶的浓度太低了?跑出来的条带就容易散掉。缓冲液不新鲜也会这样子的,配出来的胶和电泳液就不大ok~
2楼2008-07-11 00:32:19
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mikezhuang

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
条带弥散,1,引物的特异性不强
              2,提高退火温度
RNA的质量如何:它是根本。
3楼2008-07-11 09:26:49
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chuyinghao

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
1 检查一下你的试剂盒的问题,是什么牌子的,牌子不好效果可能不好,是否过期!
2 RNA电泳是否为三条带!比例如何?是否28S为18S的2倍!RNA是否降解??
4楼2008-07-11 09:43:18
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

我的RNA提取还是效果不错的,不过先按照大家的建议改进一下吧,谢谢了
5楼2008-07-11 14:41:02
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

我用QIAGEN来提取总RNA,用invitrogen的SuperScript 111 First-Strand System for RT-PCR做CDNA第一链反应,后面就是普通PCR反应,不知道会有啥问题
6楼2008-07-11 14:55:53
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