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2.5. Acridine Orange Staining. At the fifth day of culturing, cells grown on different filmswerewashedwith PBS and stained with 0.1mg/mL acridine orange (Sigma-Aldrich) at room temperature in darkness for 30 min. Then, all the samples were washed with PBS to remove the residual dye and observed through an inverted fluorescencemicroscope (Nikon Ti). 2.6. Cell Viability Assay. Cell viability was measured with Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Dojindo, Japan) according to the manufacture’s protocol. The amount of the formazan dye generated by the activity of dehydrogenases in cells on highly water-soluble tetrazolium salt is directly proportional to the number of living cells. Cells were cultured on different PHBVfilms in 48-well plates with six repeats. In brief, at 1, 3, and 5 days after cell seeding, 20 μL ofCCK-8 solution was added to each well and incubated in the incubator for 3 h; then, 100 μL of solution per well was transferred to a 96-well plate and read at 450 nm with a microplate reader (Symergy HT, Biotek). Cell viability can be continually tested in the same well without any toxicity to the cells. |
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Malyhon: 金币+11, ★★★★★最佳答案 2015-04-28 12:31:44
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2.5.吖啶橙着色。 在培养的第五天,用PBS洗涤生长于不同膜上的细胞并在室温下于暗处用0.1mg/mL的吖啶橙（西格玛-奥德里奇产品）对其着色。 然后,所有样品用PBS洗涤以除去残留的染料，并通过倒置荧光显微镜(尼康Ti)观察。 2.6.细胞活力检测。 细胞活力是用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8,日本,同仁公司）按照生产商的方案测量的。 由高水溶性四唑盐上的细胞内脱氢酶的活性度所产生的甲臜染料的量与活细胞数目成正比。 细胞于48-孔板中不同PHBV膜上培养，重复六次。总之,在细胞接种后的第1、3和5天, 将20μL的CCK -8溶液加到每一孔中并于细菌培养器中培养３小时；然后,将每孔100μL溶液移至一个96 -孔板上并用酶标仪（Symergy HT, 美国伯腾仪器有限公司）测出450 nm处的读数。细胞活力检测可以于同一个对细胞没有任何毒性的孔中反复地进行。 |
2楼2015-04-27 20:22:01
