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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 做WB，80kDa的蛋白用什么样的电泳条件和转膜条件比较合适？（湿转）
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Ustar

禁虫 (小有名气)
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1楼2015-04-24 20:20:37
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相忘于少年

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xh0421 at 2015-04-28 01:15:28
Stacking gel buffer
0.5M Tris(sigma-Aldrich)
0.4g SDS (Bio-Rad)
Prepare in ~90mL water(sigma-Aldrich), adjust PH to 6.8, add water to a total of 100mL, store at 4 degree

Stacking gel
3.2mL D ...

thanks

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
修和无人见，存心有天知。
12楼2015-04-28 07:23:30
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Ustar: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-26 14:34:01
这个蛋白大小属于中间大小，我一般一块10-12%胶100V，一个小时，基本上指示剂到尾部，转膜的话，湿转也是100V，大概300mA，一个小时，绝大部分蛋白都能转印到膜上。只是要注意降温，不要温度太高就可以了
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2楼2015-04-25 00:42:13
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xh0421

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Gel running
10% Bio-rad pre-casting gel, 200volts all the way, 40-45min.
or
Hand-casting gel, 4% stacking, 12% resolving, 80volts when in stacking(10-15 min), change to 200volts when you see bromophenol blue in resolving gel (35-40 min). You can get the band as straight as drawing with a ruler.

Transfer
200 volts, 2 hr, 4 degree.
or 80 volts, overnight, 4 degree.

I used to do a lot of WB for a protein at 83kD, if you need, I can send you my protocol.
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Ustar
3楼2015-04-25 01:43:56
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Ustar

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2015-04-26 14:34:14
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