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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 这样的免疫印迹图片可以能用于发表论文吗？
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一路向前看

铁虫 (初入文坛)

[求助] 这样的免疫印迹图片可以能用于发表论文吗？ 已有3人参与

如图，上边一排条带是目的基因蛋白，下边一排条带是内参蛋白，没有Marker，内参总是连在一起（减少上样量也未解决），目的蛋白和内参蛋白是分开曝光的，这样的图片能发表论文吗？有经验的同志帮忙回答下，谢谢

这样的免疫印迹图片可以能用于发表论文吗？
12333.jpg
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1楼 2015-04-23 11:47:50
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-26 22:35:45
基本可以可定这样是不行的，前段时间刚投了一篇别人给的修改意见有一条就是没有marker，另外，目的条带跑的太差，一个就是点样问题，还有就是可能SDS-PAGE胶做的有问题。
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2楼2015-04-23 16:07:57
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-04-26 22:36:14
可以用来发文章的，现在的western blot 结果一般都要求附上相对表达值（灰度扫描）；
对于这种情况，减少上样量会有帮助的，看楼主的片子，目的蛋白也挺强的，上样量减少到三分之一都可以，或者降低GAPDH的抗体浓度，缩短曝光时间，如果片子放上去就拿出来还是很强，那就建议两张甚至3张片子叠加一起压片，最短时间显影，最上面那张一定不会这么强了，另建议注意配胶（玻璃板要绝对干净）和电泳的细节，上样体积要一致（不一致的用1×loading补齐）
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医学&统计学
3楼2015-04-23 16:14:03
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一路向前看

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 董博士 at 2015-04-23 16:14:03
可以用来发文章的，现在的western blot 结果一般都要求附上相对表达值（灰度扫描）；
对于这种情况，减少上样量会有帮助的，看楼主的片子，目的蛋白也挺强的，上样量减少到三分之一都可以，或者降低GAPDH的抗体浓度 ...

首先很感谢你的回复。我曾把蛋白样品稀释10倍，曝光时间也缩到很短，内参还是多少会连在一起，我想问的是这样发表文章会有问题吗？还有内参和目的蛋白分开曝光的，会对结果有影响吗？
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4楼2015-04-23 16:47:15
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一路向前看

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by WHABnew at 2015-04-23 16:07:57
基本可以可定这样是不行的，前段时间刚投了一篇别人给的修改意见有一条就是没有marker，另外，目的条带跑的太差，一个就是点样问题，还有就是可能SDS-PAGE胶做的有问题。

首先感谢你的回复。针对你回复的目的条带跑的太差可否说的详细点，具体怎么看，我是新手，忘见谅。
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5楼2015-04-23 16:50:02
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董博士

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一路向前看 at 2015-04-23 16:47:15
首先很感谢你的回复。我曾把蛋白样品稀释10倍，曝光时间也缩到很短，内参还是多少会连在一起，我想问的是这样发表文章会有问题吗？还有内参和目的蛋白分开曝光的，会对结果有影响吗？...

个人觉得是可以分开曝光的，但是一定要是同一个样跑出来的，内参是为了蛋白的调齐，看的是个目的蛋白/内参的相对值
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医学&统计学
6楼2015-04-24 09:19:14
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WHABnew

新虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-26 22:37:15
引用回帖:
5楼: Originally posted by 一路向前看 at 2015-04-23 16:50:02
首先感谢你的回复。针对你回复的目的条带跑的太差可否说的详细点，具体怎么看，我是新手，忘见谅。...

比如你第一个孔那种就不能用，还有就是你的上样量，以前我做实验的时候的蛋白浓度30ng/μl，上样20μl，浓度在大点都ok，还有就是玻璃板一定要洗的非常干净，不然你的胶可能做不好，跑出来的条带也就不好。你目的条带曝光完之后的膜可以洗干净之后继续用来做内参，但是保证内参大小在膜上，如果你的目的条带没连在一起，而内参还是这样建议稀释比例变大。
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7楼2015-04-24 10:06:54
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-04-26 22:37:32
没问题，可以用于发表
要是不能分开曝光，那在一个blot上同时看七八个蛋白根本没法做了
我最多一次要用6种不同的抗体来检测，其中两个抗体的目的蛋白分子量还几乎一样，需要把第一个抗体洗脱下来再和第二个抗体孵育
有时候还不得不把blot沿着marker水平切成三份，分别和三种不同抗体过夜孵育，marker早就切没了
内参连在一起也没有大碍，一般分子量小的蛋白都会有点扩散，正常现象
至于marker有没有也没关系，不是每个实验室都有可以显色marker的试剂和设备的
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
8楼2015-04-24 22:37:23
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