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baiyangnjau木虫 (正式写手)
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[求助]
亚细胞定位前后不一致，请帮忙分析原因，具体问题如下，谢谢！ 已有3人参与
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| 半年前构建了目的蛋白-GFP的融合蛋白（GFP在C端，做亚细胞定位，我是做植物的，用的是烟草瞬时表达，一直做的结果是线粒体定位，已经下了结论认为是线粒体定位，最近又顺带看了一下，结果麻烦大了，显示的是膜定位，做了好几次都这样，重新提质粒重新转农杆菌烟草表达还是膜定位，又把GFP连到我的蛋白的N端，也是这样，怎么办啊？感觉要疯了，请各位多多提出自己的看法，非常感谢！ |
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11楼2015-07-04 10:51:43
starseacow
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2楼2015-04-18 14:12:55
baiyangnjau
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3楼2015-04-19 20:36:18
starseacow
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
baiyangnjau: 金币+100, 谢谢您的帮忙！ 2015-04-20 12:59:39
感谢参与，应助指数 +1
baiyangnjau: 金币+100, 谢谢您的帮忙！ 2015-04-20 12:59:39
| 首先，检查你用的农杆菌，看看有没可能被污染了。其次，膜信号很可能是自发荧光，现在你的融合蛋白很可能没有很好地表达，有条件最好做WB验证一下表达，另外也可能需要考虑重新准备一批农杆菌。再次，你做定位有没用合适的marker，最好把marker共转进去作对照。 |
4楼2015-04-19 22:39:13