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lcqyp

金虫 (正式写手)

[求助] 谁用过半胱氨酸-咔唑法,求指导

最近做酶活,目前选定用半胱氨酸咔唑法,通过测定核酮糖的生成量,确定酶活力,可是刚开始做标曲就遇到问题啦,竟然不显色,我是加了0.7ml 50ug/ml的核酮糖,加水补足1ml,然后加入0.2ml 1.5%半胱氨酸盐酸溶液,接着加入6ml 70%硫酸,混匀,立即加入0.2ml 0.12%乙醇咔唑溶液,混匀,放入60度水浴锅,10min后测定吸收值。有两个问题:
     1、实验过程中,一种情况是加入乙醇咔唑溶液立即出现粉红色,水浴过程中出现紫红色,另一种是加入乙醇咔唑溶液都没有颜色,到底哪种是正常的现象?我个人偏向第一种,但是再也重复不出来了
     2、乙醇咔唑溶液避光保存,那么请问做实验的时候要不要避光?
     3、做标曲应该用水补足体积,还是用我蛋白酶的buffer?
请各位大神指导,不胜感激!
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