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lcqyp金虫 (正式写手)
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[求助]
谁用过半胱氨酸-咔唑法，求指导
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最近做酶活，目前选定用半胱氨酸咔唑法，通过测定核酮糖的生成量，确定酶活力，可是刚开始做标曲就遇到问题啦，竟然不显色，我是加了0.7ml 50ug/ml的核酮糖，加水补足1ml,然后加入0.2ml 1.5%半胱氨酸盐酸溶液，接着加入6ml 70%硫酸，混匀，立即加入0.2ml 0.12%乙醇咔唑溶液，混匀，放入60度水浴锅，10min后测定吸收值。有两个问题： 1、实验过程中，一种情况是加入乙醇咔唑溶液立即出现粉红色，水浴过程中出现紫红色，另一种是加入乙醇咔唑溶液都没有颜色，到底哪种是正常的现象？我个人偏向第一种，但是再也重复不出来了 2、乙醇咔唑溶液避光保存，那么请问做实验的时候要不要避光？ 3、做标曲应该用水补足体积，还是用我蛋白酶的buffer? 请各位大神指导，不胜感激！ |
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