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EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！ 已有3人参与
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求教各位，我用的试剂盒是Roche的DIG Gel Shift 2nd Generation. 这个探针和这个蛋白是肯定结合了的，我之前做出来过，这次只是想做一个梯度进一步验证一下，实验条件（包括蛋白浓度的大概范围，胶浓度，电泳条件等）和以前也没什么区别，但却看不出蛋白带了（如图片1所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，泳道8是探针+蛋白+过量竞争探针），之后又做了一次，提高了探针浓度，结果更糟糕（如图片2所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，探针+蛋白+过量竞争探针的对照组没有截入图中）。请有经验的同学帮帮我，看看蛋白结合带跑成这样到底是什么原因，不胜感谢！ 图片1.png  图片2.png |
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fenleixue
至尊木虫 (小有名气)
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没用过这个试剂盒，但是图二2-7往上迁移的部分，特别是最上面就是蛋白带，我纯化蛋白之后跑非变性胶也会这样。楼主试试把电泳的电压或电流调低一点，跑慢一点。跑完之后用SYBR Gold之类的核酸染料稍微泡一下胶，看看探针是不是往上迁移了，然后再把胶冲洗一下，用蛋白染料去看蛋白的迁移情况 发自小木虫Android客户端 |
24楼2016-11-26 02:45:31
2楼2015-04-14 09:39:45
3楼2015-04-14 17:21:20
4楼2015-04-14 17:57:20