| 查看: 4870 | 回复: 24 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！ 已有3人参与
|
|||
求教各位，我用的试剂盒是Roche的DIG Gel Shift 2nd Generation. 这个探针和这个蛋白是肯定结合了的，我之前做出来过，这次只是想做一个梯度进一步验证一下，实验条件（包括蛋白浓度的大概范围，胶浓度，电泳条件等）和以前也没什么区别，但却看不出蛋白带了（如图片1所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，泳道8是探针+蛋白+过量竞争探针），之后又做了一次，提高了探针浓度，结果更糟糕（如图片2所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，探针+蛋白+过量竞争探针的对照组没有截入图中）。请有经验的同学帮帮我，看看蛋白结合带跑成这样到底是什么原因，不胜感谢！ 图片1.png  图片2.png |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有216人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
fenleixue
至尊木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13951.3
- 散金: 2
- 红花: 5
- 帖子: 279
- 在线: 86.4小时
- 虫号: 449068
- 注册: 2007-11-02
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
|
没用过这个试剂盒，但是图二2-7往上迁移的部分，特别是最上面就是蛋白带，我纯化蛋白之后跑非变性胶也会这样。楼主试试把电泳的电压或电流调低一点，跑慢一点。跑完之后用SYBR Gold之类的核酸染料稍微泡一下胶，看看探针是不是往上迁移了，然后再把胶冲洗一下，用蛋白染料去看蛋白的迁移情况 发自小木虫Android客户端 |
24楼2016-11-26 02:45:31
2楼2015-04-14 09:39:45
3楼2015-04-14 17:21:20
4楼2015-04-14 17:57:20
