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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！ 已有3人参与

求教各位，我用的试剂盒是Roche的DIG Gel Shift 2nd Generation. 这个探针和这个蛋白是肯定结合了的，我之前做出来过，这次只是想做一个梯度进一步验证一下，实验条件（包括蛋白浓度的大概范围，胶浓度，电泳条件等）和以前也没什么区别，但却看不出蛋白带了（如图片1所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，泳道8是探针+蛋白+过量竞争探针），之后又做了一次，提高了探针浓度，结果更糟糕（如图片2所示，泳道1只有探针，泳道2-7是探针+依次加量的蛋白，探针+蛋白+过量竞争探针的对照组没有截入图中）。请有经验的同学帮帮我，看看蛋白结合带跑成这样到底是什么原因，不胜感谢！

EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！
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EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！-1
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1楼 2015-04-13 20:22:22
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by bingrener at 2015-06-03 15:53:16
楼主两次实验用的是同一批蛋白吗？我觉得楼主很可能是蛋白的问题，如果不是同一批，可能这批的蛋白活力不行，如果是同一批，不知时间相隔多久？有可能是蛋白降解了，活力下降。建议重新纯化蛋白。

您好，首先谢谢您的应助。我做的这两次用的不是同一批蛋白，是两次纯化出来的，蛋白纯化后我会在15天之内使用，不用时保存在-80度冰箱，感觉不会降解啊。。。
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17楼2015-07-06 12:22:12
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
顶一下，请大家说帮帮忙啊！！！
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2楼2015-04-14 09:39:45
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
请大家帮帮忙，谢谢！
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3楼2015-04-14 17:21:20
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fificici

新虫 (初入文坛)
我也遇到过这种情况 楼主解决了没？
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4楼2015-04-14 17:57:20
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