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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药剂学 » 关于体外肿瘤3d模型的建立
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金虫 (小有名气)

[求助] 关于体外肿瘤3d模型的建立 已有2人参与

本人现在在作关于肺癌细胞A549的实验，想建立一个体外的3d肿瘤细胞球，按照文献上做了很多实验，依然无法做出来。
主要尝试了是两种方法，一种是选用低熔点琼脂糖和培养基混合后（2%的琼脂糖），加热到80℃混匀后，冷却到室温左右加入细胞和培养基与96孔圆底培养版（U底)再1500转离心10min。结果发现细胞并没有很好的聚在一起，很不规则的分散状态，没有文献中图片那样很规则的球状，而且感觉细胞不再生长，并没有明显的增值。想问问大家其中是不是有什么技巧，还是A549这种细胞就不太适合做肿瘤球（关于A549查到的文献确实较少）。
还有一种方法就是直接在圆底96孔板中离心细胞，没有加入琼脂糖，结果显示细胞都在孔底，且是圆形的，但是面积很大，在共聚焦上不易于观察。
求助做过肿瘤球的大神或者有这方面经验的人。
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1楼 2015-04-13 15:29:00
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冯又又

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用胶原水凝胶或者matrigel包埋哦
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2楼2015-04-22 09:31:46
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金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冯又又 at 2015-04-22 09:31:46
可以用胶原水凝胶或者matrigel包埋哦

你好，能否详细一点，提供一些文献参考
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3楼2015-04-25 15:17:03
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bigbang_0_0

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试一下悬滴培养板；
另外，我们做血管化肝脏3D培养时，先取 60ul/well matrigel （>10mg/ml）加入到96孔板中凝固成胶，后接种16X10^4个肝细胞（或肝母细胞）、11.2X10^4个HUVEC和3.2X10^4个间充质干细胞，24h即可在凝胶表面形成spheroid。
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4楼2015-05-18 13:01:16
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金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bigbang_0_0 at 2015-05-18 13:01:16
试一下悬滴培养板；
另外，我们做血管化肝脏3D培养时，先取 60ul/well matrigel （>10mg/ml）加入到96孔板中凝固成胶，后接种16X10^4个肝细胞（或肝母细胞）、11.2X10^4个HUVEC和3.2X10^4个间充质干细胞，24h即 ...

你好，细胞在是matrigel凝固之后加入的？ 球是长在matrigel表面还是会嵌入里面，如果是在表面的话，换培养液的时候肿瘤球不会被吸走或者破裂么，你好，请问你们有类似的文献可以参考么。
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5楼2015-05-19 13:52:17
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bigbang_0_0

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
2876x: 金币+10, ★有帮助 2015-06-10 14:36:07
2876x: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-06-10 14:37:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2876x at 2015-05-19 13:52:17
你好，细胞在是matrigel凝固之后加入的？ 球是长在matrigel表面还是会嵌入里面，如果是在表面的话，换培养液的时候肿瘤球不会被吸走或者破裂么，你好，请问你们有类似的文献可以参考么。...

你好，matrigel厚层成胶凝固后种细胞，球长在表面，但会有一些新生的微血管会深入到胶里面，换培养液的时候不必担心被吸走或破裂，动作轻一点就行，pubmed搜Takanori Takebe，另外，我不清楚你们构建3D球球的目的？是要做药筛吗还是只是拍个照片，测个体积（一般都是在24h以内完成）啥的？如果是前者，或者你需要长期培养，你要考虑肿瘤细胞和HUVEC本身的增殖会导致球的破裂，需要先摸索一下HUVEC、MSC和功能细胞的共培养比例，因为只有在特定的比例范围内，球才不易破裂
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6楼2015-06-08 13:55:04
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2876x

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bigbang_0_0 at 2015-06-08 13:55:04
你好，matrigel厚层成胶凝固后种细胞，球长在表面，但会有一些新生的微血管会深入到胶里面，换培养液的时候不必担心被吸走或破裂，动作轻一点就行，pubmed搜Takanori Takebe，另外，我不清楚你们构建3D球球的目的？ ...

首先谢谢你，我是做药剂的，做肿瘤球是为了体外探测剂型对于肿瘤内部的穿透性，如果成球快的话可以在24h内做完实验。请问是要将肿瘤细胞和HUVEC细胞混合加入么，他们会在matrigel上自聚集成球？不需要的外力（如离心的作用么）？
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7楼2015-06-10 14:35:54
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bigbang_0_0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 2876x at 2015-06-10 14:35:54
首先谢谢你，我是做药剂的，做肿瘤球是为了体外探测剂型对于肿瘤内部的穿透性，如果成球快的话可以在24h内做完实验。请问是要将肿瘤细胞和HUVEC细胞混合加入么，他们会在matrigel上自聚集成球？不需要的外力（如离 ...

自聚集是不需要外力的，细胞会自动迁移聚集的，HUVEC是用来成血管的，MSC 则是成球所必需的，需要将HUVEC、MSC和肿瘤细胞混合加入
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8楼2015-06-11 19:42:20
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xmcykf888

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2017-06-05 16:47:03
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