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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 材料表征测试 » 关于Nucleus Co-localization experiment，细胞核共定位？是什么测试，怎么做？
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烯烯嚷嚷

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于Nucleus Co-localization experiment，细胞核共定位？是什么测试，怎么做？ 已有1人参与

审稿意见，要求证明我的材料是进入到细胞核内部，补充一个Nucleus Co-localization experiment。
之前是激光共聚焦看到材料在细胞核内聚集。这个细胞核共定位是什么？
是用一个发射波长不同染色材料先染细胞核？然后确定细胞核的位置，再加上我的材料，证明我的材料在细胞核里么？
如果是这样，和做激光共聚焦的流程是一样的？
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Yearbyyear,handinhand,betterandbetter~
1楼 2015-04-09 13:33:10
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烯烯嚷嚷

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by conanzzz at 2015-04-10 09:58:00
LZ我觉得你理解都对的,用Hochest或者DAPI染核就成

多谢回复。我查阅了一下相关文献，应该就是这样做了。
但还有一个问题，我的样品在350-500纳米激发波长下自发光，一般共聚焦用405纳米荧光最强。但是现在用DAPI的话，DAPI也是在405激发，会覆盖我的样品荧光~~~~~~~~~~~~如果先405激发，看到DAPI的较强荧光（同时叠加着样品荧光），再用488激发看我样品的自发荧光，然后两个图层覆盖，这样样品荧光非常弱，结果有说服力么？
Hochest是什么？发什么光？

多谢回复！
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Yearbyyear,handinhand,betterandbetter~
3楼2015-04-13 10:30:31
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
烯烯嚷嚷: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-13 10:25:45
LZ我觉得你理解都对的,用Hochest或者DAPI染核就成
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2楼2015-04-10 09:58:00
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
烯烯嚷嚷: 金币+5 2015-04-14 08:58:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by 烯烯嚷嚷 at 2015-04-13 10:30:31
多谢回复。我查阅了一下相关文献，应该就是这样做了。
但还有一个问题，我的样品在350-500纳米激发波长下自发光，一般共聚焦用405纳米荧光最强。但是现在用DAPI的话，DAPI也是在405激发，会覆盖我的样品荧光~~~~~ ...

Hochest33342或33258与DAPI染核的荧光波长是差不多的;如果你的样品发射谱与核染料发射谱重叠了最好选择一个其它波长的核染料,我记得有红光的核酸染料(EB好像就是,但有毒),你查查看;如果非要用蓝色核染料,你的样品488激发时可以把强度调高一些使共定位更明显些
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4楼2015-04-13 12:36:47
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烯烯嚷嚷

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by conanzzz at 2015-04-13 12:36:47
Hochest33342或33258与DAPI染核的荧光波长是差不多的;如果你的样品发射谱与核染料发射谱重叠了最好选择一个其它波长的核染料,我记得有红光的核酸染料(EB好像就是,但有毒),你查查看;如果非要用蓝色核染料,你的样品4 ...

多谢！
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Yearbyyear,handinhand,betterandbetter~
5楼2015-04-14 08:58:51
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