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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 倒置荧光显微镜观察菌丝细胞内ROS
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酸奶一号

银虫 (小有名气)

[求助] 倒置荧光显微镜观察菌丝细胞内ROS

各位微生物大牛们，不知哪位同仁以前或正在做有关真菌菌丝荧光染料染色观察细胞内细胞器或相关代谢分子的试验，请帮忙看以下几张图片并作一些专业性指导，权当交流了，多谢各位大牛。仪器及配套软件：奥林巴斯IX71倒置荧光显微镜，和cellsens standard, 所用染料：DCFH-DA和Fluo-3AM，测定指标：ROS 和钙离子，测得一些图片如下：

倒置荧光显微镜观察菌丝细胞内ROS
ROS-1


倒置荧光显微镜观察菌丝细胞内ROS-1
Ca-1


倒置荧光显微镜观察菌丝细胞内ROS-2
ROS-2


倒置荧光显微镜观察菌丝细胞内ROS-3
Ca-2
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1楼 2015-04-07 21:14:35
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lincyb

铜虫 (著名写手)
请问你的样品是直接DCFH-DA处理后，立即上透射上观察吗？
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2楼2015-04-08 12:00:33
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酸奶一号

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lincyb at 2015-04-08 12:00:33
请问你的样品是直接DCFH-DA处理后，立即上透射上观察吗？

不好意思，最近有点忙，没来得及回复。菌丝培养好后，直径经DCFH-DA或Fluo-3AM染色处理，然后PBS洗涤2次，再进行荧光观察。
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DNA-RNA-dsRNA-ssRNA-cDNAs
3楼2015-04-09 09:44:07
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酸奶一号

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lincyb at 2015-04-08 12:00:33
请问你的样品是直接DCFH-DA处理后，立即上透射上观察吗？

不好意思，最近有点忙没来得及回复。菌丝经培养好后，用一定浓度的DCFH-DA或FLUO-3AM染料分别进行30-40min孵育，再经PBS洗涤2次，最后进行荧光观察
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DNA-RNA-dsRNA-ssRNA-cDNAs
4楼2015-04-09 09:45:29
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lincyb

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酸奶一号 at 2015-04-09 09:45:29
不好意思，最近有点忙没来得及回复。菌丝经培养好后，用一定浓度的DCFH-DA或FLUO-3AM染料分别进行30-40min孵育，再经PBS洗涤2次，最后进行荧光观察...

好的。谢谢 我做的是动物细胞  RAW 264.7
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5楼2015-04-09 11:43:28
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酸奶一号

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lincyb at 2015-04-09 11:43:28
好的。谢谢 我做的是动物细胞  RAW 264.7...

动物细胞要好做的多
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6楼2015-04-09 19:58:40
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lincyb

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 酸奶一号 at 2015-04-09 19:58:40
动物细胞要好做的多...

7楼2015-04-11 09:57:08
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Acollast

新虫 (初入文坛)
楼主，你的问题解决了吗？
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8楼2015-07-17 16:03:39
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小福仔

铁虫 (初入文坛)
你好，我最近也在做真菌细胞内ROS含量的测定，拿菌丝测，会出现分布不均匀的现象，所以想问下楼主你有试过用流式或者荧光酶标仪测过相对含量吗
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9楼2016-03-23 21:18:09
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屎胖纸

铁虫 (小有名气)
请问楼主怎么制片呢？是菌丝培养好后，挑取菌丝放载玻片上，加上盖玻片，然后直接观察吗？倒置显微镜是不是要将载玻片反过来放，这样盖玻片是不是会掉下来呢？
我之前想做真菌菌丝荧光染色，是在载玻片上涂培养基后接种真菌，待长出菌丝后加滴加染剂并加盖玻片去看，效果非常差。麻烦楼主提供一下经验，谢谢。
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10楼2019-07-30 20:45:04
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