应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE图求分析
52/1返回列表
查看: 2351  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

七小艾

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE图求分析 已有6人参与

图中是放线菌菌体破碎上清的SDS-PAGE图，样品最终是用来跑双向的，所以为了减少蛋白降解提高蛋白溶出率，用了不同的细胞裂解方法和几种不同的裂解液，结果如图所示。
A/B/C/D所用裂解液：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail
E:Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail, 8M 尿素
F：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail， 7M尿素，2M硫脲
G：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail，2%SDS（终浓度，SDS细胞破碎后加，65℃处理10min）

细胞破碎方法：A涡旋振荡，B超声，CDEFG机械均质

想请教高手几个问题
1、用SDS处理后的样品蛋白胶为什么会跑成这样？上面大分子量的蛋白全没了，下面糊成一片？做过不加SDS进行65℃处理，虽然蛋白有一定程度降解，但大分子量的蛋白条带还是有的，说明不是高温造成的结果。不知道样品中过量的SDS对跑胶有没有什么影响？
2、尿素和硫脲对SDS-PAGE是不是也有影响？因为加了尿素和硫脲的样品蛋白胶颜色反而不如不加的，但是蛋白浓度测定（Bradford法和BCA法都测过）结果显示加了尿素和硫脲的蛋白浓度较高，是不是尿素和硫脲对Bradford法和BCA法都有干扰（硫脲对BCA有干扰是确定的）？
3、蛋白胶每次跑出来下面小分子量部分都没有清晰的条带，而是糊成一片的，这是什么原因？

SDS-PAGE图求分析
IMG_0578_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-04-07 15:46:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天际雾影

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 七小艾 at 2015-04-20 16:25:56
应该不是胶的问题，经常也帮别人带样品，人家的样品都是正常的...

那我也没遇到这么诡异的了。有时候自己制的胶会跑出一些莫名其妙的带。换掉制胶溶液就好了。但你这种我就没遇到了。
赞一下 回复此楼
13楼2015-04-20 17:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你没有marker吗？marker跑的如何？
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-08 14:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七小艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bao可雅 at 2015-04-08 14:18:52
你没有marker吗？marker跑的如何？

Marker用完了就没跑，不过以前做的时候Marker是正常的，但是下面小分子量部分也是没有清晰的条带，而是糊成一片的
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 16:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

琼琼雨露

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是电泳时间太长，小分子蛋白都跑出去了
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-08 19:20:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +4 18419759900 2026-03-25 4/200 2026-03-26 08:53 by zhyzzh
[考研] 289求调剂 +15 硕星赴 2026-03-23 15/750 2026-03-26 02:16 by BruceLiu320
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +4 小小陈小小 2026-03-22 7/350 2026-03-25 19:07 by 星空星月
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 085602 289分求调剂 +7 WWW西西弗斯 2026-03-24 7/350 2026-03-25 14:28 by 3Strings
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭