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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 载体构建
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fwhnny

金虫 (小有名气)

[交流] 载体构建

各位高手：
    我最近才开始做载体构建，可是做了一两个月了始终没有成功。
    我用的是pET-32a载体，酶切位点是Xho1和EcoR1.酶切之后胶回收并电泳检测，证明是回收回来了的，可是连接之后再转化的时候总长出白板，一个菌落都没有。新手上路，请各位大侠高手指点！非常感谢！
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1楼 2008-06-28 08:18:53
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tianxie33

铁虫 (初入文坛)
我觉得也有可能是你转化的问题,新手总是会在开始的时候范一些自己没注意的错误,我一开始也这样,重新转了两次就长出来了,现在基本没什么问题了
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5楼2008-06-28 16:44:32
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
是不是感受态有问题？还是连接体系的问题？或者是抗生素的问题？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2008-06-28 10:19:29
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zyk_527

银虫 (小有名气)
你目的基因上XhoI的保护碱基加的够不？你用的是那个公司的酶？这个酶切点有点难切，建议你过夜酶切。同时感受态，现用现做。转化效率绝对的不一样。
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3楼2008-06-28 13:02:53
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fwhnny

金虫 (小有名气)
目的基因是装载在T载体上切的，切下来了。如果没有切下来的话，也应该长菌阿。
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4楼2008-06-28 15:43:32
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