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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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fwhnny

金虫 (小有名气)

[交流] 载体构建

各位高手:
    我最近才开始做载体构建,可是做了一两个月了始终没有成功。
    我用的是pET-32a载体,酶切位点是Xho1和EcoR1.酶切之后胶回收并电泳检测,证明是回收回来了的,可是连接之后再转化的时候总长出白板,一个菌落都没有。新手上路,请各位大侠高手指点!非常感谢!
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

是不是感受态有问题?还是连接体系的问题?或者是抗生素的问题?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2008-06-28 10:19:29
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zyk_527

银虫 (小有名气)

你目的基因上XhoI的保护碱基加的够不?你用的是那个公司的酶?这个酶切点有点难切,建议你过夜酶切。同时感受态,现用现做。转化效率绝对的不一样。
3楼2008-06-28 13:02:53
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fwhnny

金虫 (小有名气)

目的基因是装载在T载体上切的,切下来了。如果没有切下来的话,也应该长菌阿。
4楼2008-06-28 15:43:32
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tianxie33

铁虫 (初入文坛)

我觉得也有可能是你转化的问题,新手总是会在开始的时候范一些自己没注意的错误,我一开始也这样,重新转了两次就长出来了,现在基本没什么问题了
5楼2008-06-28 16:44:32
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fwhnny

金虫 (小有名气)

可是我做了阴性对照了的,就时转了空的pET-32a,长的满板都是的
6楼2008-06-30 08:26:24
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