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103007054019

新虫 (小有名气)

[求助] 求助 已有2人参与

请教高人指点，如果在大肠杆菌的转化实验中冰浴后的42℃热激30s时的温度稍微有一度的误差，也就是不到42℃，40--41℃这样子的会影响转化实验吗？急需解决此问题，求帮助，求指点。
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1楼 2015-03-30 08:48:44
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
103007054019: 金币+2 2015-03-31 09:35:18
应该没什么影响，毕竟只是约1度的误差，我们还做过冰浴后37℃水浴5min的，效果差不过，原理都一样，就是让细菌细胞膜增加活动力及形变，包纳进重组质粒。不过你的42℃热击时间感觉有点短，一般90S，让其反应时间充分一点
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2楼2015-03-31 01:36:57
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lvsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
103007054019: 金币+2 2015-03-31 09:35:29
1.不算致命影响。2.成不成也只能硬着头皮上了。3.同意二楼时间短了点的说法，我们实验室大多数人用45秒到一分钟，不过有个兄弟一直坚持30秒，说是他整篇毕业论文都用一个protocol看起来连续性好点--原因够古怪但也没见他出什么问题。

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3楼2015-03-31 02:44:28
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103007054019

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-03-31 01:36:57
应该没什么影响，毕竟只是约1度的误差，我们还做过冰浴后37℃水浴5min的，效果差不过，原理都一样，就是让细菌细胞膜增加活动力及形变，包纳进重组质粒。不过你的42℃热击时间感觉有点短，一般90S，让其反应时间充分 ...

哦哦，不好意思，是我着急写错了，是90s的，做了三次转化了，就是不长，我感觉应该不是转化的问题吧，应该是质粒的问题吧。非常感谢您的指导，非常感谢！
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4楼2015-03-31 09:32:10
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103007054019

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvsd at 2015-03-31 02:44:28
1.不算致命影响。2.成不成也只能硬着头皮上了。3.同意二楼时间短了点的说法，我们实验室大多数人用45秒到一分钟，不过有个兄弟一直坚持30秒，说是他整篇毕业论文都用一个protocol看起来连续性好点--原因够古怪但也没 ...

好的，谢谢您的指点，时间是我着急写错了，热激是90s的，可是昨天又做的转化还是没有长，所以我怀疑可能是质粒的问题吧！非常感谢您的回帖。
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5楼2015-03-31 09:34:48
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 103007054019 at 2015-03-31 09:34:48
好的，谢谢您的指点，时间是我着急写错了，热激是90s的，可是昨天又做的转化还是没有长，所以我怀疑可能是质粒的问题吧！非常感谢您的回帖。...

不长得话，你的空对照长得怎样？如果空对照菌（转化了不带质粒的菌）长得很好说明你的感受态及转化条件都没有问题，最有可能就是重组质粒没有构建好。目的基因和酶切原质粒重组时量一定要足，重组几率才大，祝你成功
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6楼2015-03-31 11:32:02
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103007054019

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-03-31 11:32:02
不长得话，你的空对照长得怎样？如果空对照菌（转化了不带质粒的菌）长得很好说明你的感受态及转化条件都没有问题，最有可能就是重组质粒没有构建好。目的基因和酶切原质粒重组时量一定要足，重组几率才大，祝你成 ...

重组质粒，也即载体是100ng，量应该足了吧，以前做过的，很顺利就成功了，不知道这次是为什么，转化的长了菌落，可是PCR检测没有条带，现在真是不知道原因在哪了，真是坎坷啊！哎！
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7楼2015-04-07 09:07:27
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