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103007054019

新虫 (小有名气)

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请教高人指点,如果在大肠杆菌的转化实验中冰浴后的42℃热激30s时的温度稍微有一度的误差,也就是不到42℃,40--41℃这样子的会影响转化实验吗?急需解决此问题,求帮助,求指点。
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
103007054019: 金币+2 2015-03-31 09:35:18
应该没什么影响,毕竟只是约1度的误差,我们还做过冰浴后37℃水浴5min的,效果差不过,原理都一样,就是让细菌细胞膜增加活动力及形变,包纳进重组质粒。不过你的42℃热击时间感觉有点短,一般90S,让其反应时间充分一点
2楼2015-03-31 01:36:57
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lvsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
103007054019: 金币+2 2015-03-31 09:35:29
1.不算致命影响。2.成不成也只能硬着头皮上了。3.同意二楼时间短了点的说法,我们实验室大多数人用45秒到一分钟,不过有个兄弟一直坚持30秒,说是他整篇毕业论文都用一个protocol看起来连续性好点--原因够古怪但也没见他出什么问题。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-03-31 02:44:28
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103007054019

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-03-31 01:36:57
应该没什么影响,毕竟只是约1度的误差,我们还做过冰浴后37℃水浴5min的,效果差不过,原理都一样,就是让细菌细胞膜增加活动力及形变,包纳进重组质粒。不过你的42℃热击时间感觉有点短,一般90S,让其反应时间充分 ...

哦哦,不好意思,是我着急写错了,是90s的,做了三次转化了,就是不长,我感觉应该不是转化的问题吧,应该是质粒的问题吧。非常感谢您的指导,非常感谢!
4楼2015-03-31 09:32:10
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103007054019

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvsd at 2015-03-31 02:44:28
1.不算致命影响。2.成不成也只能硬着头皮上了。3.同意二楼时间短了点的说法,我们实验室大多数人用45秒到一分钟,不过有个兄弟一直坚持30秒,说是他整篇毕业论文都用一个protocol看起来连续性好点--原因够古怪但也没 ...

好的,谢谢您的指点,时间是我着急写错了,热激是90s的,可是昨天又做的转化还是没有长,所以我怀疑可能是质粒的问题吧!非常感谢您的回帖。
5楼2015-03-31 09:34:48
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 103007054019 at 2015-03-31 09:34:48
好的,谢谢您的指点,时间是我着急写错了,热激是90s的,可是昨天又做的转化还是没有长,所以我怀疑可能是质粒的问题吧!非常感谢您的回帖。...

不长得话,你的空对照长得怎样?如果空对照菌(转化了不带质粒的菌)长得很好说明你的感受态及转化条件都没有问题,最有可能就是重组质粒没有构建好。目的基因和酶切原质粒重组时量一定要足,重组几率才大,祝你成功
6楼2015-03-31 11:32:02
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103007054019

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-03-31 11:32:02
不长得话,你的空对照长得怎样?如果空对照菌(转化了不带质粒的菌)长得很好说明你的感受态及转化条件都没有问题,最有可能就是重组质粒没有构建好。目的基因和酶切原质粒重组时量一定要足,重组几率才大,祝你成 ...

重组质粒,也即载体是100ng,量应该足了吧,以前做过的,很顺利就成功了,不知道这次是为什么,转化的长了菌落,可是PCR检测没有条带,现在真是不知道原因在哪了,真是坎坷啊!哎!
7楼2015-04-07 09:07:27
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