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是水货

木虫 (著名写手)

[求助] 做电镜的方法 已有4人参与

求助:我是做蛋白凝胶的,以前做电镜都是冻干后直接去测量,现在有文献报道说做成胶体后,溶于2.5%戊二醛(pBS PH7.2)中1h。然后自来水冲洗,在采用50%,70%,80%,90%,100%的乙醇中,然后制成干样。


那么我有以下问题想咨询:
一、我做的是明胶,凝胶性较强,应当凝胶成什么状态为好?譬如浓度是6.67%,那么凝胶多久后合适?因为凝胶时间过长会导致测不出效果。
二、用不同梯度的无水乙醇洗脱,每个梯度需要的时间是多久?
三、洗脱后有的还没有完全干,有文献报道说是液氮或者干冰下弄干。实验室没有这个怎么办?
四、如果用冷冻干燥机抽真空干燥,样品中含有少量的戊二醛和乙醇,会发生危险吗?

曾经发过e-mail问过这个领域的大牛,却没得到任何回复。希望大家给予指点。
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不倒翁X

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 是水货 at 2015-06-12 13:04:57
谢谢,你的回答很到位,但还有几个细节我要咨询下你。首先你固定的的时候是室温还是4℃;磷酸盐漂洗是多久换一次。为什么乙醇浓度在30%,50%,70%条件下需要在4℃?
我做凝胶的时候发现,如果在4℃放置太久,在去 ...

固定是在常温。
漂洗一次大约10min。
为什么乙醇浓度在30%,50%,70%条件下需要在4℃?这个问题我也不太明白,抱歉啊!
我做的是鸡肉肠切薄片即可进行处理。
13楼2015-06-12 21:01:35
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查看全部 14 个回答

tofeya

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你去问下做电镜的老师,有些地方可以做前处理的,加入戊二醛之后直接送样就好了
想得太多,做得太少
2楼2015-04-25 12:59:09
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赖穗0911

新虫 (小有名气)

你好 同学 我和你做的类似 想知道你怎么做的 咱们可以交流一下吗?扣扣怎么样

[ 发自小木虫客户端 ]
求解答
3楼2015-04-26 23:56:12
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sytucom

版主 (知名作家)

日光之下,并无新事

【答案】应助回帖

我当时做电镜用的是石蜡切片。
第四个问题:完全可以放心,真空冷冻干燥温那么点有机溶剂完全没有问题。
已有的事,后必再有,已行的事,后必再行。
4楼2015-04-27 09:22:37
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