| 查看: 109 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 xht 的 5 个金币 | |||
[交流]
求助连接转化
|
|||
|
最近在做表达，一直不成功。 我用的载体是pET30a，酶切位点是Nco11 和 Sal1，载体酶切是两个单酶切，中间做乙醇沉淀，先用Sal1切的，50的体系加0.5的酶，2h，时间一长就会切碎，用Nco1切，之前的两个50体系和为一个50体系，加0.5的酶，时间长过1h就会有很多切碎，跑胶条带除了一条或两条相对清晰的带，还有大片的弥散，切胶回收效果也不是很好。但我还是努力收集载体达到一定浓度，大概20ng/ml。PCR产物（900bp）双酶切，终浓度也在10到20ng之间，1：1比例4度连接过夜，转出来的都是蓝斑。我想可能是部分没有酶切完全的自连了（酶切时间再长就碎了，不知道该怎么控制）但是也有好多是完全的，为什么都连不上呢？ 我该怎么做？请各位大虾指教，谢谢了 |
回复此楼» 猜你喜欢
压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！
已经有4人回复
-
081200-314
已经有4人回复
-
289求调剂
已经有9人回复
-
085405 考的11408求各位老师带走
已经有3人回复
-
339求调剂
已经有6人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有4人回复
-
085701环境工程，267求调剂
已经有15人回复
-
材料求调剂一志愿哈工大324
已经有9人回复
-
292求调剂
已经有15人回复
-
304求调剂
已经有5人回复
mimisikai
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4928.1
- 散金: 167
- 红花: 1
- 帖子: 116
- 在线: 18.4小时
- 虫号: 433549
- 注册: 2007-08-18
- 专业: 疫苗学
2楼2008-06-26 21:43:31
3楼2008-06-27 09:08:22
