| 查看: 5163 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求高人指点不对称PCR得到的产物是否为单链 已有1人参与
|
||
|
为了得到单链DNA，做了不对称PCR，模板为双链PCR产物，下游引物浓度为上游引物浓度的1/50。电泳条件为1%普通琼脂糖凝胶，120V电压，EB染色。从左到右依次为4500Marker、gDNA、双链PCR产物、不对称PCR产物、2000Marker。可是从条带位置看不对称PCR产物只比双链PCR产物小一点儿，不像论坛里有人说的单链PCR比双链PCR要小一半左右所出的位置。 请高人指点：我这个不对称PCR得到的产物是单链DNA吗？如果是的话，这个单链出的位置对吗？ ![\"求高人指点不对称PCR得到的产物是否为单链\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/0325/bw134h3455949_1427236863_554.jpg#opennewwindow\") |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有281人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大片段PCR扩增求助
已经有23人回复
- 提取DNA后，PCR电泳无条带
已经有5人回复
- 单链DNA大小为100np,PCR后跑电泳，条带在200bp左右是怎么回事？求助！！
已经有4人回复
- 关于核酸染料标记DNA
已经有21人回复
- 能不能只用一条引物做不对称PCR？
已经有11人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- micro ? small ? short ? RNA
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR产物的bp数是指双链的总碱基数还是单链的长度？
已经有5人回复
8楼2016-01-27 16:47:35
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kaqikun: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-29 15:33:23
感谢参与，应助指数 +1
kaqikun: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-29 15:33:23
| 不对称PCR有两种方法，第一种，在PCR扩增时，先用等浓度的引物PCR扩增，先得到双链DNA，然后以这双链DNA为模板，再以其中的一条引物进行第二次PCR，制备单链DNA。第二种方法，用不等量的PCR引物进行扩增，，扩增后产生大量的单链DNA。这对引物分别称为非限制引物和限制引物，他们的比例一般为50-100:1.在PCR扩增的最初10-15个循环中，产物大多为双链DNA，但是当限制性引物消耗完之后，非限制性引物就会产生大量的单链DNA。这就是不对称PCR。不对称PCR的关键就是控制限制性引物的绝对量，这需要经过实验多次摸索优化两条引物的量而最终得到最佳的比例。你现在的方法一次成功是有情可原的，关键是要优化两条引物的量，你现在的这个产物应该不是单链DNA，或者你直接按照第一种方法做。 |
4楼2015-03-25 08:48:28
5楼2015-03-25 10:03:41
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
6楼2015-03-25 10:04:52
