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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 求助求助~用GC/FID测橄榄油里的甾醇(sterols)物质，神马都跑不出来T—T
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助求助~用GC/FID测橄榄油里的甾醇(sterols)物质，神马都跑不出来T—T

之前一直在做液相色谱的，突然接到一个要用GC/FID的活，还催得特别急。在这里请大家帮我看看到底出了什么问题。
标准方法是用30 m * 0.25 mm * 0.25 微米的DB-5柱子，进样温度280C，柱温恒温260C，检测器300C，split ratio是15:1，进样量1微升，载气恒速1.5mL/min，氢气：30mL/min，空气：400mL/min，尾吹气是氦气：30mL/mim，跑一个样55分钟要的东西都出来了，各个峰分得也挺清楚的。我们实验室只有一根30 m * 0.25 mm * 0.1 微米的DB-5HT柱子，我试了进样温度300C，柱温280C，检测器320C，60分钟，其他设定都一样，结果什么峰都没有。。。连光跑标样也跑不出来。。。然后各种换温度还是啥都没有。。。难道我试错方向了吗？或者跑的时间还不够长？那个0.25和0.1微米的膜厚度跑出来结果能差那么多吗？
还有一个问题是，正式样品是要经过TLC处理和甲硅烷基化的，有一个做了很久这个实验的人告诉我光跑内标物5alpha-cholestan-3beta-ol的话直接上柱子就行，不需要甲硅烷基化。。。这样真的没问题吗？会不会堵柱子？我用的是0.2%的5alpha-cholestan-3beta-ol（溶剂是乙酸乙酯）。

我实在没头绪了，想改成梯度也不知道怎么改。。。恳请版上各种大神不吝赐教！先谢过了！
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1楼 2015-03-21 02:50:11
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
自己顶顶~~
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2楼2015-03-21 15:13:55
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chihaijun

至尊木虫 (著名写手)
待测物沸点是多少？正如你文中所说的没有硅烷化，该物质挥发性不好，气相不能气化。
色谱柱膜厚会影响上样量和分离度，但和出不出峰关系不大。
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3楼2015-03-22 18:04:11
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chihaijun at 2015-03-22 18:04:11
待测物沸点是多少？正如你文中所说的没有硅烷化，该物质挥发性不好，气相不能气化。
色谱柱膜厚会影响上样量和分离度，但和出不出峰关系不大。

查了下5-α-cholestan-3-β-ol的沸点是455.532°C at 760 mmHg。。。所以难道是我进过一个未硅烷化的样把柱子堵住了？但是流速还是准确的呀。。。这样是不是说明柱子没堵呢？还有样品没法出峰难道是我样品的硅烷化不对？方法里说加300微升硅烷化试剂，我为了让样品量多点加了1毫升，常温下硅烷化了半小时（方法说15分钟）但是这样不是会硅烷化更彻底么？真的一个峰都没有···难道是我样品准备问题？唉~好迷惑。。。
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4楼2015-03-23 04:27:53
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chihaijun

至尊木虫 (著名写手)
一般来说气相的柱子不容易堵，本来进样量就少，而且大部分是溶剂，还有分流后进到色谱柱的就更少了。
不出峰可能是前处理有问题，不太好确定：比如硅烷化试剂失效？反应条件不对（是不是应该无水反应）？等等
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5楼2015-03-23 09:09:25
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chihaijun at 2015-03-23 09:09:25
一般来说气相的柱子不容易堵，本来进样量就少，而且大部分是溶剂，还有分流后进到色谱柱的就更少了。
不出峰可能是前处理有问题，不太好确定：比如硅烷化试剂失效？反应条件不对（是不是应该无水反应）？等等

谢谢回复！实在无语了~前处理都是那个很有经验的人跟我一起做的。她在她自己实验室做了几百几千次了··试剂什么的也是按照她的买的。硅烷化试剂刚开的瓶现配的。唯一的不同是最后她加了300微升，我加了1毫升，但是这不会说连峰都出不来了吧···郁闷~
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6楼2015-03-23 10:53:04
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