| 查看: 3174 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助细胞内总胆固醇/游离胆固醇提取方法（LC-MS）用 已有1人参与
|
||
 最近打算测定巨噬细胞内的胆固醇，由于细胞量较少，因此考虑用LC-APCI-MS进行测定，但是在提取胆固醇时遇到了较大的问题，请诸位高手指教。我考察的提取方法： 1，细胞生理盐水洗两遍，1ml生理盐水中刮下，超声裂解破碎。 2-1，对于总胆固醇，160ul裂解液中加入300ul的15%KOH（乙醇溶液），震荡至澄清。 2-2，对于游离胆固醇，160ul裂解液中加入300ul的 8.9mM KOH（乙醇溶液），80℃水浴1h。 3，二者皆加入等体积的异丙醇：正己烷（v/v 1:4），震荡30s进行进行萃取，萃取产物800g离心5min，取上清入新管 4，使用异丙醇：正己烷（v/v 1:4）重复萃取共三次，合并上清液，真空减压干燥 存在问题： 主要问题存在于总胆固醇的提取步骤，第一次加入萃取溶剂460ul后，震荡分层共三层，上清液不足300ul，中层浑浊，最下层澄清不足100ul。 再次加入300ul萃取溶剂，震荡分层所得上清不足200ul，最下层量增加，中间层仍浑浊。 再次加入500ul萃取溶剂，只有两层，最下层澄清，以及上层整体浑浊。 另外，游离胆固醇的提取若按照上述方法，所得上清也会越来越少 想请教： 1、最上层是否是纯正己烷，胆固醇是否溶于其中？中层的浑浊是KOH的盐沉淀，还是蛋白。大量的KOH溶解在哪？ 2、我的操作是否有明显问题，大家有没有成熟的方法可以分享，最好能附参考文献，感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有11人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
基金未中，这种答复是模板吗？
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 血脂 总胆固醇偏低 高密度脂蛋白偏低
已经有4人回复
- 五项偏高需要注意些什么，谢谢！尿酸 、胱抑素C 甘油三酯 、总胆固醇、肌酸激酶
已经有5人回复
- 【转】解读制药强者发展历程，挖掘强者做大做强经验
已经有12人回复
- 【求助】血液或脏器中血脂和总胆固醇含量的测定方法
已经有11人回复
archbishop
禁虫 (职业作家)
- ACI: 2
- 应助: 190 (高中生)
- 贵宾: 3.213
- 金币: 13682.5
- 散金: 5394
- 红花: 150
- 沙发: 5
- 帖子: 4552
- 在线: 1148.3小时
- 虫号: 792812
- 注册: 2009-06-12
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
- 管辖: 分析
3楼2015-03-20 19:35:45
cashfox
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 10342.2
- 散金: 260
- 红花: 1
- 帖子: 555
- 在线: 148.8小时
- 虫号: 857956
- 注册: 2009-09-27
- 专业: 生物化学
lidajiu2楼2015-03-20 19:11:48
4楼2015-03-20 21:07:34
5楼2015-03-20 21:08:35
投票:
30