| 查看: 392 | 回复: 2 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
Mr_wang2006木虫 (小有名气)
Scientist
|
[交流]
【请教】神经干细胞培养问题
|
|||
|
最近，我开始进入神经干细胞方面的研究。首先是查阅大量神经干细胞培养的方法和protocol，然后进行胚胎12~14天的胎鼠/小鼠神经干细胞培养，7~8天后进行传代，现把在实验中遇到的问题发出，向大家请教，谢谢。具体疑问如下： 1、一般胚胎神经干细胞培养原代接种密度是2*10E5/ml，但我的神经干细胞必须达6*10E5/ml，甚至更高，才能出现漂亮的神经球，不知什么原因？ 2、我的培养液是DMEM/F12+N2+肝素钠+bEGF+FGF+Glu+双抗，有人建议我尽量再加上B27,否则成球不好，我不知两者有什么区别？还有文献加LIF,有什么作用？ 3、传代时用胰酶硝化37度10 min，再用胰酶抑制剂终止，接种时发现细胞形态与原代细胞不太一样，呈现条索状，且遮光性不好，不知怎么造成？ 4、传代培养24 h发现所有培养皿“神经球”出现贴壁，更奇怪的是球四周长了很长的绒毛，但中间质地同原代神经球，不知什么原因？ 因实验需要，急需解决问题，麻烦高手赐教，我先谢@ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 研二 |
» 猜你喜欢
有没有接到消息还是一样焦虑的。。。
已经有32人回复
-
新冠相关的专项项目 什么时候出结果？
已经有7人回复
-
运动系统论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
医学考研调剂
已经有1人回复
-
今年青拔 什么时间节点？
已经有45人回复
-
QB 倒计时
已经有15人回复
-
表面活性剂在层析填料中是否残留
已经有21人回复
-
文献求助，急急急！！！！
已经有2人回复
jiangy0122
荣誉版主 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 2.8
- 金币: 6863.7
- 红花: 1
- 帖子: 2631
- 在线: 83.6小时
- 虫号: 30974
- 注册: 2003-12-05
- 专业: 神经系统和精神疾病
- 管辖: 医学
2楼2008-06-24 10:19:52
Mr_wang2006
木虫 (小有名气)
Scientist
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2942.3
- 帖子: 186
- 在线: 14.8小时
- 虫号: 274359
- 注册: 2006-08-26
- 性别: GG
- 专业: 卫生毒理
|
通过查找文献和论坛学习，我来回答以上问题，若有不同意见请指正： 1、可能与取材部位有关，我取材时范围较大，含有大量的杂细胞，于是必须用大量计数细胞来培养成球；也可能是我培养的NSC的细胞存活下降所致。 2、有人说一般神经干细胞原代培养最好用B27，传代后可改用N2（原因有待追究） 3、已经订购invotrigen公司的胰酶替代物trypLE TM express，不需进行终止反应，且对神经干细胞损伤不大，增加细胞存活。 4、传代细胞贴壁神经球已经发上分化，许多神经干细胞已经从球内迁移出而进行分化，可能与没有半量换液所致，直接用新鲜培养液培养传代。 我的理解不知对不对，请大家指正。 |
3楼2008-06-24 11:15:29
