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[有奖交流]HPLC使用注意事项及HPLC柱子使用经验之谈(一些不同的见解)
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HPLC使用注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜 过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲 洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆 外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查 并清洗。清洗方法；①以异 丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清 洗；⑧用10％稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相 的清洗。 11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的 流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 本人觉得这个注意事项有些不妥的地方： 1.流动相最好是用高效液相色谱级的，但是色谱级的比较贵，考虑到成本在做一些高波段的检测时可以用分析级的甲醇或乙腈，但是需要过0.45um的膜。HPLC级的试剂可以不用过膜直接作为流动相使用。 2.流动相最好要进行脱气。最好的脱气方式是氦气脱气，其次是真空脱气，超声是最差的脱气方法，一般只能脱掉30%的气体。对高压梯度影响不大，低压梯度一定要接在线脱气机。 6.对进样器的清洗不能用缓冲盐溶液。 7.蛋白、血样和生物样品可能对C18柱进行污染，只要选择合适的流动相，对样品进行有效的前处理，还是可以使用C18柱对这些样品进行分析的，不过做样好要进行有效的清洗。 其他项较为合理。 [ Last edited by dnp on 2008-6-23 at 10:26 ] |
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