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细菌PCR总是点的有些样不出条带已有6人参与
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提取土壤总DNA，利用细菌V6-V8区引物968F/1401R进行PCR扩增，点的样总是有那么几个不出条带，不清楚什么情况，有师姐说是我做PCR加样操作出问题，可是每次做8个，加样操作都是一样的啊，怎么就有些样p出来，有些没有出来呢。PCR25ul体系：上下游引物各1.5ul，2.5mM each dNTPs 2ul，10xPCR Buffer 2.5 ul，Taq聚合酶0.25ul，模板DNA 2 ul，无菌水 15.25 ul。PCR扩增条件：94 oC变性5min,接着20个循环（94 oC变性1 min，67 oC退火1 min，72 oC延伸1 min，每个循环退火温度降0.5 oC），接着 15个循环（94 oC变性1 min，57oC退火1 min，72 oC延伸1 min，每个循环退火温度降0.5 oC），最后再72 oC延伸10 min。 10.30.2.jpg |
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