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matthewtai木虫 (小有名气)
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[求助]
做激酶复合物时，加ATP产生沉淀，请教各位该如何改进反应，谢谢！
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| 具体情况如下：我需要做一个人源激酶，这个激酶由两个亚基组成。我通过原核表达把两个亚基表达出来，想通过反应将这两个亚基结合并激活。反应物如下：两个亚基，缓冲液，无机盐，ATP，真核裂解液。在加完蛋白、缓冲液、无机盐、真核裂解液时还是澄清的，一加入ATP后就会产生浑浊。本人也调整了不同浓度的ATP以及蛋白浓度，但还是有许多沉淀产生。请问应该如何优化这个反应？是不是我加东西的顺序有问题？还有如何检测蛋白复合物，用SDS-PAGE的话，又会把复合好的蛋白再分开无法检测到是否有复合物产生。请各位赐教，非常感谢！ |
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