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一个纠结了我很久很久的问题，层析中的结合与洗脱机制是什么？ 已有2人参与
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纠结了很久很久的层析机制问题，基本上可以概况为目标物和层析介质之间的结合作用力是一种什么作用力？为什么在这种条件下两者能结合，在另外的条件下，两者又能分开呢？结合和分离的机制是什么？作用力是如何被解除的？。。。 1. ProteinA亲和层析中，单抗与ProteinA之间的特异性吸附是一种什么样的作用力？为什么这样的作用力可以在洗脱液为低PH时可以被解除，从而单抗被洗脱？ 2. Ni柱亲和层析中，HIS与镍离子之间的作用力又是什么？为什么低盐的时候，HIS可以被结合，而高盐的时候，HIS被洗脱？也就是说为什么HIS与镍离子之间的作用力可以在高盐环境中被解除？ 3. 反相层析和疏水相互作用层析的原理都是根据分子的疏水性，是么，这两种层析在原理上有什么相同和不同？ |
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【答案】应助回帖
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亲和层析是依靠蛋白与相应配体之间的结构互补而产生的分子间作用力，包括了离子键、范德华力、疏水力等，而改变PH值之后，可以使得蛋白的结构发生改变，使得两者的结构不再互补，比如说在PH=7时，蛋白是球状，亲水基团在外而疏水基团在外，表面带负电，而柱上偶联的抗体表面带正电，形状与蛋白能像锁与钥匙那样楔合，而当PH=5时，蛋白的结构发生改变，变为乱麻状，结构松散疏水基团外露、表面电荷变为正电荷，从而与柱上抗体不再结合而被洗脱下来。 在不同浓度的盐溶液下纯合，NI与His也是类似，通过改变盐浓度来改变蛋白表面电荷状态下使之结合和洗脱。 |
4楼2015-03-11 17:26:17
Bookaholic
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