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liangying9835

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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hqj200808: 金币+20, ★★★很有帮助, 非常感谢！!! 2015-03-10 23:38:21
RXMCDM: 翻译EPI+1 2015-03-11 20:40:28

3.β-cryptoxanthin(β-隐黄质)的分离
β-隐黄质的分离采用硅胶色谱。流动相选取图2所示的各种溶媒进行薄层层析（TLC），根据得到的RF值来选择最终条件。结果：采用正己烷：乙醇20:1作为最终条件。
分离条件采用30mm玻璃柱，硅胶长150mm，Wakogel C-200（150度2小时活化处理），流速0.3-0.5滴/秒，流分分别浓缩干燥，采用HPLC测定β-隐黄质的浓度。
4 β-隐黄质标准品测定及浓度测定条件
1)浓度测定
将β-隐黄质标准品用正己烷溶解，测定451nm时的吸光度。采用文献报道的吸光度系数（E=2460），标准溶液中β-隐黄质的浓度采用下式计算：
A=E *c * l
A 吸光度 E比吸光度 C 物质的摩尔浓度 l 溶液层厚度
然后将标准溶液中的正己烷蒸发，MTBE同浓度复溶，用MTBE分别2,20,200倍稀释，HPLC送样20ul，通过各峰的面积求得检量限度。标准品含有微量的α-隐黄质，因此通过β-隐黄质峰面积/(β-隐黄质峰面积+α-隐黄质峰面积）给予矫正。
2）HPLC分析条件
除了色谱柱温度以外的HPLC分析条件及浓度矫正采用的是墨田等人的方法。色谱柱：YMC公司制造Carotenoid 5u C30，HPLC：岛津公司 HPLC-20A 检测器：岛津公司 SPD-20AV 流动相：A溶剂甲醇：MTBE：水：醋酸铵=81:15:4:0.1（v/v/v/w）B溶剂甲醇 :MBTE:醋酸铵=10:90:0.1（v/v/w),时间梯度：0-30分钟 B0-85% 50分 100% 70分结束。流速1.0ml/min 温度：32度检出波长：450nm 注入量：20ul

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2楼2015-03-10 13:32:40

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