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有人做过 trypsin, 以 BAEE 为底物的 Km 和 Vmax吗
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按照 sigma中 用 BAEE 测定 trypsin 活性的protocol， 活性是测出来了，线性关系也不错，可是当我采用不同浓度的BAEE， 测Km 和 Vmax 时， 吸光值的变化很神奇， 当BAEE＜0.25mM时， 吸光值 虽然整体趋势向上，当忽高忽低。。。。。这是为什么？ BAEE 为0.25 mM时，吸光值的变化几乎呈线性 而当BAEE的浓度为1mM 和 2.5 mM时， 不加酶时，底物的吸光值已超过2， 估计反应最最初的几秒就反应完了，这是不是没有什么意义了。。。。 希望有经验的 朋友，可以在这里分享下如何用BAEE测定 Km和Vmax的，不甚感激。 |
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