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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

[求助] 有人做过 trypsin, 以 BAEE 为底物的 Km 和 Vmax吗

按照 sigma中 用 BAEE 测定 trypsin 活性的protocol, 活性是测出来了,线性关系也不错,可是当我采用不同浓度的BAEE, 测Km 和  Vmax 时, 吸光值的变化很神奇,
当BAEE<0.25mM时, 吸光值 虽然整体趋势向上,当忽高忽低。。。。。这是为什么?
BAEE 为0.25 mM时,吸光值的变化几乎呈线性
而当BAEE的浓度为1mM 和 2.5 mM时, 不加酶时,底物的吸光值已超过2, 估计反应最最初的几秒就反应完了,这是不是没有什么意义了。。。。
希望有经验的 朋友,可以在这里分享下如何用BAEE测定 Km和Vmax的,不甚感激。
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

然后我搞不懂的是,BAEE 被水解后,产生BA, 然后据说,BA的吸光值远大于BAEE, 这个远大于,我也没发现呀。。。。。然后 为什么吸光值会 忽高忽低呢, 我是每3s 测一个数据,测10min........
2楼2015-03-06 20:35:10
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