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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 有人做过 trypsin, 以 BAEE 为底物的 Km 和 Vmax吗
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

[求助] 有人做过 trypsin, 以 BAEE 为底物的 Km 和 Vmax吗

按照 sigma中 用 BAEE 测定 trypsin 活性的protocol， 活性是测出来了，线性关系也不错，可是当我采用不同浓度的BAEE， 测Km 和  Vmax 时， 吸光值的变化很神奇，
当BAEE＜0.25mM时， 吸光值 虽然整体趋势向上，当忽高忽低。。。。。这是为什么？
BAEE 为0.25 mM时，吸光值的变化几乎呈线性
而当BAEE的浓度为1mM 和 2.5 mM时， 不加酶时，底物的吸光值已超过2， 估计反应最最初的几秒就反应完了，这是不是没有什么意义了。。。。
希望有经验的 朋友，可以在这里分享下如何用BAEE测定 Km和Vmax的，不甚感激。
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1楼 2015-03-06 20:32:03
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毛阿毛

金虫 (正式写手)
然后我搞不懂的是，BAEE 被水解后，产生BA， 然后据说，BA的吸光值远大于BAEE， 这个远大于，我也没发现呀。。。。。然后 为什么吸光值会 忽高忽低呢， 我是每3s 测一个数据，测10min........
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2楼2015-03-06 20:35:10
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