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humants金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】NdeⅠ 或XhoⅠ连接实验该注意什么(问题已经解决，谢谢大家的帮助@！)
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各位老师你们好，我最近打算做NdeⅠ 和XhoⅠ两个粘末端链接，听说要用平末端的链接条件，而且比较难连，我先撑着实验还没开始先问清楚，免得出了问题再去补救。 不知道你么有没有做过的，在做链接的时候应该注意些什么东西？ 1.链接体系？ 我打算用这个体系 10×T4 DNA Ligase Buffer 2.5 ul DNA片段* 约0.3 pmol 载体DNA** 约0.03 pmol T4 DNA Ligase 1 ul dH2O up to 25 ul 2.链接温度和时间？ 我打算用16度 16h 3.用不用加PEG8000？ 谢谢您的解答。  注：我的载体是PET-28大小是5.3kb，目的基因是1kb. [search]NdeⅠ XhoⅠ[/search] [ Last edited by humants on 2008-6-27 at 19:34 ] |
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