| 查看: 797 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
guantou木虫 (正式写手)
|
[交流]
荧光实时定量PCR引物设计需要特别注意哪些?
|
||
|
请教下高手们,real-time PCR引物的设计需要注意哪些跟一般PCR不同的地方? 产物长短? TM值范围? 有的说退火温度一般比TM低5度? 染料法,不做探针 知道的指点下啊 小弟非常感谢! [ Last edited by guantou on 2008-6-11 at 20:45 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨
已经有8人回复
-
295求调剂
已经有4人回复
-
0856求调剂
已经有5人回复
-
材料学硕333求调剂
已经有10人回复
-
299求调剂
已经有6人回复
-
一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂
已经有6人回复
-
289求调剂
已经有12人回复
-
070305高分子化学与物理 304分求调剂
已经有6人回复
-
0703化学调剂，求导师收
已经有10人回复
-
各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕
已经有5人回复
yangym1123
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1963.2
- 帖子: 230
- 在线: 30.2小时
- 虫号: 397777
- 注册: 2007-06-10
- 专业: 动物形态学及胚胎学
2楼2008-07-07 21:26:09
3楼2008-07-08 11:06:37
wyzl2007
金虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1135.2
- 红花: 2
- 帖子: 250
- 在线: 58.8小时
- 虫号: 167324
- 注册: 2006-01-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2008-07-08 12:00:16
|
我也在做实时定量 之前找过一些资料 下面的资料可能有用 SYBR G 1.1 primer 长度18-30bp左右 GC含量30-80%(40-60% ideally) Tm在63-67℃(64℃ ideally)，Ta在58-62℃(59℃ ideally) 引物与temp无错配，尤其是3′ 避免连续相同的碱基，尤其是靠近3′的3个或者3个以上的G或者C 3′不为T(允许错配) 引物上无发卡，不形成二聚体，尤其是3′端 跨外显子设计引物，blast检验引物是否特异 1.2 amplicon 长度80-150bp GC含量30-80%(40-60% ideally) 避免二级结构，www.bioinfo.rpi.edu/applications/mfold 2. Taqman 2.1 probe 长度为18-30bp，20bp为最佳，如果长度超过30bp，quencher需要放在距离5′18-25bp处 GC含量30-80%，Tm比引物高8-10℃(genotyping高8℃，expression高10℃) 选择C多于G的链，尽可能得使探针靠近引物而不发生重合 探针与模板引物不发生错配 避免连续的相同碱基，尤其是C或者G 避免5′G 2.2 primer 同SYBR 2.3 amplicon 同SYBR 3. 如果老板挺富余 找ABI定探针，有现货定现货，没现货让他们设计，到手的成功率按照我做到现在100多个探针95%左右。 尽可能定带MGB接头的，可以让实验做得很美。 – |
5楼2008-07-08 16:37:26
