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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 用LB培养猪粪中大肠杆菌24h长不出，是否因样品放-20度冰柜四个月冻死？
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xiaoyuaaa

新虫 (初入文坛)

[交流] 用LB培养猪粪中大肠杆菌24h长不出，是否因样品放-20度冰柜四个月冻死？ 已有3人参与

核心问题求教：
试验是培养计数猪粪的大肠杆菌和乳酸菌（购买的MRS培养基），不过猪粪放-20度冰柜四个月了，不知道能否长出？还是冻死了？
次核心问题：
试验主要是对大肠杆菌菌群计数，是否应该用MAC或者EMB鉴别培养基？？
三：
配大肠杆菌的LB培养基，看许多文献上都提到是用胰蛋白胨，现在实验室只有普通蛋白胨，就做试验了，请问用普通蛋白胨或者胰蛋白胨对实验结果是否影响？
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1楼 2015-01-31 14:12:32
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yjj1983112

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流！ 2015-01-31 20:36:19
对大肠杆菌计数最好是使用麦康凯或伊红美蓝培养基。但如果样品放在-20度4个月后，样品没加保护剂，菌肯定会死亡的。建议重新采样。普通蛋白胨或者胰蛋白胨对实验结果影响并不大。
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科研静心
2楼2015-01-31 15:18:42
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xiaoyuaaa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yjj1983112 at 2015-01-31 15:18:42
对大肠杆菌计数最好是使用麦康凯或伊红美蓝培养基。但如果样品放在-20度4个月后，样品没加保护剂，菌肯定会死亡的。建议重新采样。普通蛋白胨或者胰蛋白胨对实验结果影响并不大。

谢谢！我准备换麦康凯琼脂了，请问结晶紫必须要加吗？
还有，我用mrs培养基36h成功培养出乳酸菌，推测粪样乳酸菌应该没死，那大肠杆菌应该也没事吧？
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3楼2015-01-31 16:00:25
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skull123

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyuaaa at 2015-01-31 16:00:25
谢谢！我准备换麦康凯琼脂了，请问结晶紫必须要加吗？
还有，我用mrs培养基36h成功培养出乳酸菌，推测粪样乳酸菌应该没死，那大肠杆菌应该也没事吧？...

结晶紫是用来抑制革兰氏阳性菌生长的，样品-20度4个月，个人猜测大肠杆菌估计没死
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4楼2015-01-31 21:43:01
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yjj1983112

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyuaaa at 2015-01-31 16:00:25
谢谢！我准备换麦康凯琼脂了，请问结晶紫必须要加吗？
还有，我用mrs培养基36h成功培养出乳酸菌，推测粪样乳酸菌应该没死，那大肠杆菌应该也没事吧？...

结晶紫不是必须要加的。如果用MRS分离出来乳酸菌，那大肠杆菌应该也能分离到的。
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科研静心
5楼2015-02-01 08:58:58
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xiaoyuaaa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by skull123 at 2015-01-31 21:43:01
结晶紫是用来抑制革兰氏阳性菌生长的，样品-20度4个月，个人猜测大肠杆菌估计没死...

嗯嗯，我也是这样推测的，但是之前LB培养一批36h，长的很少，等今天下午的这次MAC培养的时间到了看看……一般大肠杆菌恒温37度培养24h就可以了吧？
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6楼2015-02-02 09:29:05
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xiaoyuaaa

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yjj1983112 at 2015-02-01 08:58:58
结晶紫不是必须要加的。如果用MRS分离出来乳酸菌，那大肠杆菌应该也能分离到的。...

好的，谢谢哈，我前两天LB培养一批36h，长的很少，等今天下午的这次MAC培养的时间到了看看……一般大肠杆菌恒温37度培养24h就可以了吧？
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7楼2015-02-02 09:30:23
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yjj1983112

至尊木虫 (知名作家)
是的
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科研静心
8楼2015-02-02 19:30:08
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kika8014

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
长时间冷冻菌体活性肯定会比较低，可以尝试温度梯度，慢慢活化出来。蛋白胨影响应该不大的。
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车到山前必有路
9楼2015-02-11 16:13:21
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