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dxy324

新虫 (初入文坛)

[交流] 半贴壁细胞的培养?

请问半贴壁细胞是不是只有在大量细胞贴壁时才表示细胞状态良好?细胞要冻存时,对细胞状态有何要求?我最近养一种巨核细胞CHRF-288-11,生长很慢,是不是和换液过勤有关系,我一般2天换液一次,对贴壁的细胞不做处理,对于悬浮的进行离心换液,最近,更换一种血清,发现大量细胞悬浮,请帮忙指点,万分感谢!
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xipha

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
要求形态均一,有活力(做细胞活性染色)
冻存要求再加上处于对数期
换液可能要看下说明书
2楼2008-07-08 19:46:34
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seahow

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
没有养过你这种细胞; 但是,半贴壁细胞和贴壁细胞的好坏判断是一样的。 细胞看起来亮的。 冻存一样,当然要求状态好,处于对数其。  换液周期还行,

你的血清可能有问题。

另外,建议你细胞分瓶离心500转。

希望对你有帮助。
3楼2008-07-12 20:32:07
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+6,VIP+0):ok,不错,谢谢
如果生长缓慢,是与换液过勤有关系的
因为细胞生长时会向周围释放一些细胞因子,以达到细胞之间的交互作用
做过单细胞实验(如单抗筛选)的人可能都会在细胞培养时加入饲养细胞,也正是为达到这种目的
当细胞生长良好,尤其是培养基没有明显变色时(即培养基PH无明显变化)培养液中的代谢废物是很有限的,这时里面的细胞因子对细胞生长起关键作用
建议当培养液由红变微黄时换液
如果此时细胞未长满,可直接轻轻换液,以不吹起贴壁细胞为宜
如果长满,建议向下传代,但要保证一定比例,像生长缓慢的细胞可以按1:3传
冻存最好对数生长期
发现大量细胞悬浮,是不正常的
如果确实不好养,建议使用胎牛级血清,里面的营养成分、细胞因子丰富
楼主换血清出现的问题,很可能是换了小牛或新生牛血清所致,注意这几种血清对一些难养的细胞是有差异的

欢迎交流!
4楼2008-08-07 22:46:46
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吃木虫的鸟

铜虫 (初入文坛)

学习

偶也要做这些东东了!
5楼2008-08-10 09:13:52
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baisuilan

金虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
最近也在养半贴壁细胞,分享下小经验,仅供参考。
1、换液时不要全吸干净,留一点比较好。
2、最好别换培养基,除非新血清明显更高级。必须换的话,每次只换三分之一,让细胞有个适应过程,或者冻存一下,复苏时改用新血清。
3、含有悬浮细胞的培养液,可以离心去除细胞,取少量倒回原培养瓶,但是其实你直接全移到一个新瓶里,还能有细胞重新贴壁继续生长。如果你的细胞很金贵,可以这样试试
4、适时传次代细胞反而能长得更好,总是只换液不动贴壁的细胞,感觉细胞会长疲。按1:3比较好。
6楼2008-09-16 14:17:37
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