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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] 引物设计 已有2人参与

谁能帮忙设计一下引物啊 删除蓝色碱基（包括两个红色的碱基）对自己设计引物实在没有信心了
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  • 附件 1 : pgex-kg.doc
    • 2015-01-29 11:59:04, 100.5 K

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1楼 2015-01-29 12:00:23
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maila
2楼2015-01-30 08:28:55
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huangchj03

金虫 (小有名气)
没有理解楼主的意思
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3楼2015-01-30 16:28:10
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-01 14:57:41
不明白什么意思，目的序列到底是哪一段？
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123456
4楼2015-01-30 20:11:17
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-01 14:57:48
贝努努哈哈(西门吹雪170代发): 金币+10, 鼓励热心回帖交流 2015-02-06 20:42:52
根据同源重组，采用无连接酶构建载体，引物设计最终结果：
F：CATAAATTCCGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCAC
R：TGCGTTGCGCGGAATTTATGCGGTGTGAAATACCGCACAG

设计原理：同源重组
由于PCR产物2端存在20bp互补序列CATAAATTCCGCGCAACGCA，转化DH5α后，PCR产物在菌体内发生同源重组、环化，形成环状质粒。

实验设计及操作：
取质粒进行PCR，电泳后回收约4000bp（准确为3865bp）条带，回收产物直接转化DH5α感受态，挑克隆提质粒单酶切，跑电泳检测大小（阳性克隆应为3845bp）

设计原理及步骤见附件word文档！
引物设计
同源重组——无连接酶构建载体.png
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5楼2015-01-31 19:15:11
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiqinger at 2015-01-30 20:11:17
不明白什么意思，目的序列到底是哪一段？

就是把lacIpromoter+ lacI的序列删除
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6楼2015-02-04 18:11:55
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